GB/T 36778-2018燕麦花叶病毒检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36778-2018 燕麦花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Oat mosaic virus 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局啦告 中国国家标准化管理委员会保叩 GB/ T 36778-20 18 目lj 昌 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提出并归口。 本标准起草单位： 中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、浙江省农业科学院、中华人民共和国北 京出入境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫局。 本标准主要起草人： 郭立新、段维军、梁新苗、杨永生、孙丽英、吴薇、荣德福。 I GB/T 36778-2018 附录 C （ 规范性附录） 一步RT-PCR 检测方法 C.1 主要试剂 巳1.1 50 × TAE 缓冲液 三控甲基氨基甲炕（Tris）碱 242 g 57 . 1 mL 冰乙酸 乙二胶四乙酸（EDTA )(0 .5 m ol/L ,pH 8.0) 100 mL 双蒸水定容到 1 L。 C.1.2 6 × Loading 缓冲液 0. 25 %（质量 ： 体积） ？臭酣蓝 0. 25 %（质量 ： 体积） 二甲苯青FF 40% （质量 ： 体积） I点糖水洛液 贮存于4 °C 。 C.2 引物序列 正向引物OMVCPF, 5 - GAC AAT GGA ACA GGA TCA A T G -3 ＇；反向引物 oligo-d( T) Notl prim巳r : 5 - CAA TTC GCG GCC GC( T)i5-3 ＇；扩增区域在外壳蛋白基因和 Pol y(A）上，扩增片段大小 为 7 58 bp 0 C.3 试验步骤 C.3.1 植物总RNA 的提取 C.3. 1. 1 取 0.1 g 样品，加液氮研磨成粉末状，将研磨物迅速移入 1. 5 mL 离心管中，加入 1 mL Trizol Reagent，颠倒棍匀，2 ℃～8 ℃，12 000 K ，离心 10 min。 C.3.1.2 取上洁，15 ℃～30 ℃，放置 5 min；加入 0. 2 m