猪瘟病毒（CSFV-AB）抗体竞争ELISA检测试剂盒.doc

VDPro?VeterinaryDiagnostics 北京金诺百特科技有限公司 地址：北京市朝阳区鼎成路9号世纪宝鼎A座1105室 Tel:010Fax:010猪瘟病毒(CSFV-Ab)抗体竞争ELISA检测试剂盒 480样 一、产品类型：阻断ELISA试剂盒，检测抗猪瘟病毒抗体。 二、产品介绍： 瘟病毒属是黄病毒科的成员，对于不同种属家畜感染不同的病原，包括猪瘟病毒（CSFV）,牛病毒性腹泻病毒（BVDV），以及羊边界病病毒（BDV）。猪瘟病毒引起猪只的高度传染性、通常是致死性的疾病，临床上以发热和出血为特征，有急性或慢性表现形式。 瘟病毒是一种单股RNA病毒，编码一个单一的多聚蛋白。三种囊膜糖蛋白E0、E1、E2按顺序排列在多糖蛋白上。中和病毒感染性的抗体直接作用位于E2糖蛋白上的抗原决定位点。 猪瘟病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒是建立在多重诱捕阻断ELISA技术上，使用了CSFV E2抗原和单克隆抗体。用于检测和评估猪群免疫后CSFV中和抗体水平。 三、试验原理： 猪瘟病毒抗体阻断ELISA是将经过免疫亲和技术纯化的重组E2糖蛋白包被在酶标板上，如果样品中存在抗E2糖蛋白的抗体，那么在加入辣根过氧化物酶结合的抗E2糖蛋白单克隆抗体以及显色底物后，颜色将不会加深。颜色的OD值和血清样品中抗E2糖蛋白特异抗体的量呈负相关。样品的OD值同阳性对照以及阴性对照比较后得到血清样品中抗体的百分比值。 四、特点： 猪瘟病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒是用来检测猪血清中抗E2糖蛋白的抗体，是一种快速、简单、特异的方法，可以排除其它瘟病毒抗体比如BVDV抗体的交叉反应。该方法同中和酶联分析法（NPLA）有非常好的相关性。 同NPLA比较： 敏感度：97.7% 特异性：99.2% 五、试剂盒组成： 组份中文名称 组份英文名称 数量 1、CSFV E2糖蛋白包被板 CSFV E2 Coated Plate 5块 2、血清稀释液 Dilution Buffer 50毫升 3、10倍洗液 10 X Wash Buffer Concentrate high sodium chloride 200毫升 4、显色底物 TMB substrate 60毫升 5、终止液 Stop Solution（1 X） 30毫升 6、阳性对照血清 Porcine Positive Control 0.6毫升 7、阴性对照血清 Porcine Negative Control 0.6毫升 8、酶结合物 HRPO Anti-CSFV conjugate 50毫升 9、试剂盒操作说明书 Instruction Manual 1份 六、操作步骤： 1、实验准备 ① 使用前所有试剂盒组份都必须恢复到室温（18℃ ② 用去离子水将【10洗液】进行10倍稀释 ③ 取出【CSFV E2糖蛋白包被板】，在记录表上记录阴、阳性对照品和样品的加样位置。 2、加样 ①【CSFV E2糖蛋白包被板】每孔加人50μl【血清稀释液】； ② 加入【阳性对照血清】、【阴性对照血清】和待检血清各50μl。其中【阳性对照血清】、【阴性对照血清】各加2孔，每份待检血清加1孔； ③ 贴上封板膜，室温（15℃ - 27℃）孵育1小时 2、加【酶结合物】 ① 小心揭掉封板膜，弃去各孔中液体，拍净。每孔加洗液300μl，洗3次，最后在吸水纸上拍净； ② 每孔加入【酶结合物】100μl，室温孵育30分钟。 3、加【显色底物】 ① 弃去各孔中液体，拍净。每孔加洗液300μl，洗3次，最后在吸水纸上拍净；. ② 每孔加入【显色底物】100μl，室温孵育15分钟. 4、终止反应和读数 每孔加入【终止液】50μl，轻振混匀，置酶标仪450 nm波长处测定各孔OD450nm值. 七、结果判定 1、试验有效性判定 【阴性对照血清】OD450nm 平均值＞0.5 【阳性对照血清】OD450nm 平均值＜0.2 2、计算方法 计算待检样品CSFV 抗体的阻断率： 样品阻断率（%PC）= 【阴性对照血清】OD450nm平均值 － 样品OD450nm值 ×100% 【阴性对照血清】OD450nm平均值－【阳性对照血清】OD450nm平均值 3、判定标准 ① 样品%PC＜40%，判为阴性； 样品%PC≥40%，判为阳性； ② 如果结果可疑，检查样品有无污染或者重检； ③ 如果重检结果依然可疑，应结合猪场流行病学情况，重新采样并检测。