鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立-水产养殖专业论文.docx

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 否 如需保密，解密时间 年 月 日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此避行了审定．与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中傲了明确的说明，并表示了谢意． +研究生签名：豸火髓 时同：尹ff 年歹 月芗1日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关予保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印制本和电子版本：学校有权保存提交论文的印刷版和电子版． 并提供目录捡索和阅览服务，可以采用影印，缩印或扫描等复倒手段保存、汇编学位 论文．本人同意华中农韭大学可以用不同方式在不同媒体上发表，传播学位论文的全 部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力． 注：保密学位论文(印涉及技术秘密、囊业秘密或中请专利等潜在鲁要提交保密的论 文)在解密后适用于本授权书． 学位论文作者始撒翊 导师张p秘乞． 签名目期：汐lf年S月；1日 签名日期：知lf 年r月多f日 注：请将本表喜接装订在学位论文的扉页和目录之闯 鲤春病毒jfn症病毒单克降抗体的制备及其免疫学检测方法的建立目录 鲤春病毒jfn症病毒单克降抗体的制备及其免疫学检测方法的建立 目录 摘要 I Abstract ．．III 第一章文献综述 ．1 1．1鲤春病毒血症病毒 l 1．1．1生物学特征 ．．1 1．1．2病毒的培养增殖 l 1．1．3流行病学 ．．2 1．1．4临床症状 ．．2 1．1．5病毒基因组及结构蛋白特征 。3 1．1．6病毒分类地位 。4 1．1．7病毒检测技术 。4 1．2单克隆抗体技术 5 1．2．1单克隆抗体技术原理 。5 1．2．2单克隆抗体在水生动物疾病上的应用 ．．6 1．3酶联免疫吸附技术(ELISA) ．7 1．3．1原理 ．．7 1．3．2 ELISA的分类 。7 1．3．3 ELISA在水生动物病原检测中的应用 7 1．4本研究的目的与意义 8 第二章鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备 ．9 2．1材料与方法 9 2．1．1试验动物与毒株和细胞 。9 2．1．2试验试剂 9 2．1．3试验试液的配制 ．．9 2．1．4试验仪器 13 2．1．5鲤春病毒血症病毒(SVCV)的增殖及纯化 ．13 2．1．6小鼠免疫 ．14 2．1．7饲养细胞的制备 14 2．1．8 SP2／0骨髓瘤细胞的复苏及培养 ．．14 2．1．9免疫脾细胞的制备 15 2．1．10细胞融合 15 一华中农业火学201 一 华中农业火学201 1属硕十学位论文 一 2．1．11间接ELISA筛选方法的建立及杂交瘤细胞上清的检测 ．． M 2．1．12杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法) ．．16 2．1．13杂交瘤细胞染色体数的分析 。17 2．2结果与分析 ．．18 2．2．1 SVCV的增殖及纯化 ．1 8 2．2．2细胞融合与杂交瘤细胞株的建立 19 2．2．3杂交瘤细胞染色体数的分析 ．19 2．3讨论 ．20 2．3．1 SVCV的增殖及纯化 20 2．3．2细胞融合与杂交瘤细胞株的建立 ．20 2．3．2杂交瘤细胞株的冻存及污染控制 ．21 第三章SVCV单克隆抗体的特性 22 3．1材料与方法 22 3．1．1试验试剂 ．22 3．1．2试验试液 22 3．1．3试验仪器 。23 3．1．4 SVCV单克隆抗体的大量获得 ．23 3．1．5单克隆抗体亚类鉴定 ．23 3．1．6单克隆抗体纯化及其效价测定 ．24 3．1．7 Western blot分析 ．24 3．1．8间接免疫荧光试验 ．24 3．1．9抗原表位初步分析 25 3．2结果与分析 25 3．2．1单克隆抗体亚类鉴定 ．．25 3．2．2单克隆抗体纯化及其效价测定 26 3．2．3 Western blot分析 ．27 3．2．4间接免疫荧光试验 ．27 3．2．5抗原表位初步分析 28 3．3 j时论 ．29 3．3．1单克隆抗体纯化 ．29 3．3．2 Western blot分析 ．29 3．3．3间接免疫荧光试验 ．．29 i{ 鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立3．3．4抗原表位初步分析 鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立 3．3．4抗原表位初步分析 ．30 第四章SVCV双抗体夹心ELISA检测方法的建立 。3l 4．1材料与方法 ．．3 l 4．1．1试验试剂 3 1