chapt11-抗原抗体反应与非标记免疫分析.ppt

（一）抗原抗体反应的机理 抗原决定簇和抗体分子超变区之间的结构性互补结合，只能发生在极短距离内 1.亲水胶体转化为疏水胶体 2.抗原抗体结合力 静电引力 范德华力 氢键 疏水键 静电引力 抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互的引力，称为静电引力 ，又称库伦引力 。 例如，抗体分子上带电荷的碱性氨基酸的游离氨基(--NH3+和酸性氨基酸的游离羧基(—COO--可与抗原分子上带相反电荷的对应基团相互吸引。 这种引力的大小与两个相互作用基团间的距离的平方成反比。 范德华引力 抗原和抗体相互接近时，由于分子的极化作用而出现的引力，称范德华引力。 结合力的大小与两个相互作用基团的极化程度的乘积成正比、与它们之间距离的 7 次方成反比; 键能约为4.2---12·5kJ/mol。这种引力的能量小于静电引力。 氢键结合力 供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引力。 在抗原抗体反应中，羧基、氨基和羟基是主要供氢体，而羧基氧、羧基碳和肽键氧等原子是主要受氢体，能的大小取决于方向即氢键具有高度的方向性，因此比范德华力更具有特异性。 氢键结合力与供氢体和受氢体之间距离的6次方成反比，键能约20·9kJ/mol。 疏水作用力 两个疏水基团在水溶液中相互接触时，由于对水分子排斥而趋向聚集的力称为疏水作用力，或称为疏水键。 当抗原抗体反应时，抗原决定簇与抗体上的结合点靠近，互相间正、负极性消失，由静电作用形成的亲水层立即失去，从而促进抗原与抗体的相互吸引而结合。 疏水作用力在抗原抗体反应中的结合是很重要的。提供的作用力最大，约占总结合力的50%。 (二)抗原抗体反应的特点 3. 适宜的抗原抗体浓度和比例（定比性） 决定抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反应； 4. 抗原抗体反应的2个阶段性 第1阶段是抗原抗体特异性结合，可在数秒钟至几分钟内完成； 第2阶段是小的抗原抗体复合物靠正负电荷吸引形成较大复合物，所需时间从数分钟至数日不等。 2. 环境影响因素 电解质 在中性或弱碱性条件下表面带有较多负电荷盐促进沉淀或凝集物的生成； 温度 常为37℃， 提高反应温度可增加抗原抗体分子碰撞机会 56℃变性失活；一般反应15-40 ℃； 酸碱度 pH值6-8 当pH值接近等电点时，抗原抗体多带正负电荷相等，由于自身吸引而出现凝集，导致非特异性反应。 免疫反应的形式 均相与非均相反应 直接与竞争反应 ： 1、抗原结合价必须在2价以上； 2、抗体结合价也必须是2价或2价以上； 3、抗原抗体能形成复合物但不一定能形成沉淀； 4、抗原抗体结合形成大分子凝集物的前提是要求其结合价彼此饱和； 5、当抗原大大过量时，只有溶解状态的抗原抗体复合物，而无沉淀出现，在免疫检测中称为前带现象。 1.正向间接凝集试验 抗原致敏载体 如检测IgM 2.反向间接凝集试验 抗体致敏载体 如 检测乙肝表面抗原，甲胎蛋白等 3. 间接凝集抑制试验 抗原致敏载体与抗体为检测试剂 协同凝集 三、间接血凝试验 红细胞为载体 1.红细胞载体的致敏 红细胞载体的醛化 甲醛、戊二醛、丙酮醛 载体的致敏 2.间接血凝试验 检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体 固相间接血凝 自身红细胞凝集 一、液相内沉淀反应 1.环状沉淀试验 2.絮状沉淀试验 滴定方阵 抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。 1.直接比浊测定法 透射比浊 散射比浊 缺点 大量过剩，可溶性复合物； 维持抗体蛋白量始终过剩； 脂蛋白小颗粒。 2.双向免疫扩散 第四节 补体结合与中和试验 一、 补体结合试验 二、中和反应 中和反应（neutralization）是指毒素、酶、激素或病毒等与其相应的抗体结合后，导致它们的生物活性丧失的反应。 凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体称为中和抗体； 能与细菌外毒素结合，中和其毒性作用的抗体称为抗毒素。 毒力或毒价 病毒中和试验 病毒中和试验（virus neutralization test)是通过比较免疫血清和正常血清中和后的毒价，进而判定该免疫血清中和病毒的能力——中和价。常用的测定方法有终点法中和试验和空斑减少试验两种。 毒素中和试验 与病毒中和试验基本相同 + 病人的RBC 体内anti-Rh 由于抗体多属于IgG，分子量较小，抗体与红细胞间的结合力不能克服细胞间的排斥力，不出现凝集 + 体外加入抗人IgG 出现凝集现象，叫直接库姆试验 第三节 沉淀反应 毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，也