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幽门螺杆菌感染的实验诊断 讲课内容 第一节 幽门螺杆菌特点 第二节 幽门螺杆菌感染的检测方法 第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用 1 2 3 第一节 幽门螺杆菌特点 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori 简称HP），呈弧形或S形，有1—2个微小弯曲，属微需氧菌，在pH值为6—8时繁殖最为活跃，该菌具有丰富的尿素酶，可分解食物中的尿素产生氨，该菌生长于胃粘液深层，胃粘膜表面，多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折及腺腔内为多。 H. Pylori感染和十二指肠溃疡 H. Pylori感染 D/G细胞功能改变 遗传易感性 ↑壁细胞总体增加 B型慢性胃窦炎 ↑ 胃泌素 胃酸分泌量 H. Pylori的迁移 十二指肠粘膜胃上皮化生 十二指肠球炎 十二指肠球溃疡 H. Pylori感染和胃癌的关系 浅表性胃炎 正常胃粘膜 基因损伤 H. Pylori感染 弥漫性胃癌 萎缩性胃炎 环境因素 胃粘膜肠上皮化生 高CagA+-HP滴度 宿主因素 的H.pylori菌株感染 肠型早期胃癌 进展期胃癌 3.HP的毒力作用 取决于 ① 定植能力 ② 菌株的基因型 ③ 细菌的圆球体样型态 ④ 对抗菌药物的敏感性 第二节 幽门螺杆菌感染的检测 侵入性检测方法 非侵入性检测方法 快速尿素酶试验 病理切片染色 培养 黏膜涂片革兰氏染色 基因方法: PCR等 13C-或14C-尿素呼气试验 Hp粪便抗原试验 Hp血清抗体试验 试验原理 HP能产生丰富尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。 操作过程 活检同时取2块组织进行检测（胃窦和胃体各1块），标本放置于试剂后观察颜色变化。 注意事项 检测结果受试剂pH值、取材部位、组织大小、细菌量、观察时间、环境温度等因素影响 （一）快速尿素酶试验RUT 一、创伤性检查??? 胃镜检查胃黏膜取材, 直接涂片革兰氏染色，也可包埋切片，常规HE染色或银染，直接镜检观察Hp。 直接镜检 （二）组织学检查 1.免疫组化染色特异性高。 2.HE染色可同时作病理诊断； 3.荧光原位杂交（ FISH）具有较高敏感性 1.在胃镜取胃粘膜放在转运培养基中。 2. 接种于Hp牛脑浸液培养基，分区划线。 3. 置5-12％CO2培养箱35-37℃，3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血环。 培养过程 诊断Hp最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”。 一般用于药敏试验和科研。 （三）细菌培养 幽门螺杆菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDNA基因、VacA及CagA基因均已克隆成功，根据幽门螺杆菌不同的耙基因，设计不同的引物，从而建立不同的PCR系统，扩增产物可经凝胶电泳分析. 原理与方法 （四） 聚合酶链反应试验(PCR检测技术) 1.与细菌培养和组织学染色镜检比较无明显优越性。 2.现在可收集胃液PCR检测幽门螺杆菌敏感性高，但可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应 注：HP的基因分型（HP菌属亚群）及致病性 ? 分布比例 VacA基因 CacA基因 致病性 Ⅰ型 56% + + 胃炎、十二指肠溃疡、胃癌 Ⅱ型 16% - - 胃炎 中间表达型 28% +/- +/- ? VacA基因表达空泡毒素87KD CagA基因表达细胞毒素相关蛋白128KD CagA基因仅出现于VacA产生细胞毒效应时，是VacA产生效果的标志 原理和过程 HP能产生丰富尿素酶，能分解胃中的尿素，当整粒摄入含同位素碳-13的尿素胶囊后，碳-13尿素在尿素酶作用下，分解为氨和碳-13—二氧化碳，碳-13—二氧化碳被小肠上段吸收后，进入血循环，并随呼气排出，分析呼气中的碳-13就可诊断该细菌的存在 特点和注意事项 1.易于操作；可反映全胃Hp感染状况。 2.检测前一个周内应停用抗生素、铋剂、质子泵抑制剂等药。 3.孕妇、哺乳期妇女及儿童不宜做。 （一）13C-或14C-尿素呼气试验 二、非创伤性检查 多采用ELISA双抗体夹心法，或胶体金试条法。留取晨粪便，用稀释液稀释，再加入试条或微孔板检测。 原理与方法 （二）幽门螺杆菌粪便抗原检测 1.粪便抗原检测灵敏度高、准确性好，HP死亡但抗原成分仍保留下来，故在治疗前后都可用。 2.适用于所有年龄和类型的患者（儿童）。 多采用ELISA双抗原夹心法，或胶体金试条法。可快速检测人血清、血浆或全血中幽门螺杆菌抗