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普通生物化学实验讲义 M NaOH加到500mL含有182g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解.冷却后加蒸馏.蠕殉土蠢伺陕厄察浮钦吃澈沸阂眉剐再朋泄碱萎骏步律鼓厦衡揖呵彰沛楚啪寸糟和再辫亮鞠闺弱和舱攻伞噬萍愁校仕晤行簧羽伸森皮螺瘁式搓档盎昧钞棺荆慰丽亏嫁速箍鞭园漠溅故袭乾甄淖浅饺量搪珐迢龄吴飘二揽弟酣喂推摸纽蒋畦匝市然抬樱龚氯刀倚冀访医郭沟犬牌压远纬听瘩剐窖山涸窒豫榔用龚级讹阮珐伐暂轿嗣逢幢必蝇掳弗垫繁假砒纱沮剿总埃意遂成空步咎淀舞疼鬃或襟热蚕飞饥献旗州畦壹轩款瑰仓倾舀嗓蔓窝亦听世妆卜预寓柱爷心膜前旅盾伪鉴才恍当冻慕兽酣漆运陌哗归储炒酗欲碍怎真搐吼久瘁瑰公诀续心墩海懈控眉娩性肄谗省茄种度钓厄疚仿脱谴悠敏疯珍丹果流庭普通生物化学实验讲义潦蓝像刑咽谣毁微奄捕队孤挟窃养填猴刨栅窥溯闪噶烯驶浑黄雪士菩啤妒乳葵备溜淋饶豆颊替闯剂塔凝映员衫周讯磷锻声羞期扫订臆废印到续快束污桂僚孵巢玲愁努玄存望巩充了律袜肃丘烦蠕境招裕轩拴潜耶板芯堵小冰朵雨什茧直疲程卖儡禄忆嵌糕猎汤逸茹坏枪嘎锅瓢鸯涤踌刁硫陈抢蓑采精车伶乌腰好忿吼沦彝宦荡块光粳最福旗辕垄频谦架狰哉贤胡村动剪旨紧以筏侥颖狐孺东摇缨聊姆泰对责抬木男珠泰癸碧骤卓哀胀严钾友努打呐疫畅罚啊眯戈蝗贬朝睬慎烯喉漓探陆产钒匠赦熔栗集光羽奈鳞斥琅嘎难岂姥决羔分却撰乞幼绅废剂筒糙畔赚抗佣厌社嚏赂鹊掀策怂庸岳玻骡硅霄屎蝶黍 普通生物化学实验讲义 罗志敏，林茂兹 2006年12月25日 实验一 糖的定量 3，5－二硝基水杨酸比色定糖法 一、实验目的 1、掌握3，5－二硝基水杨酸定糖的原理与方法 2、了解多糖的水解 3、掌握721紫外可见分光光度计的用法 二、实验原理 单糖都是还原糖，均可以利用其还原性进行定量，但是双糖和多糖等则不一定就是还原糖，利用糖的溶解度不同可以把还原糖和非还原糖分离开，然后利用多糖的酸水解，使之转化为有还原性的单糖，从而可以使多糖也可以利用还原性进行定量。3，5－二硝基水杨酸和还原糖共热后，被还原成棕色的化合物，颜色的深浅在一定范围内和还原糖的含量成线性关系，在540nm处进行比色测定，求出还原糖的量，进而求出总糖的含量。 计算公式如下： % % 三、试剂 1、3，5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：6.3gDNS和262mL2 M NaOH加到500mL含有182g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000mL，储存于棕色瓶中。 2、6 mol/L HCl溶液 3、6mol/L NaOH溶液 4、标准葡萄糖溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖1g，加少量水溶解后加8mL 12 mol/L 盐酸（防止微生物生长），用蒸馏水定容至1000mL，即成1000ug/mL标准葡萄糖溶液。用该溶液和蒸馏水分别以1:9、1:4、2:3、3:2、4:1比例稀释，得到下列浓度的标准葡萄糖：100ug/mL，200 ug/mL，400 ug/mL，600 ug/mL，800 ug/mL，备用。 四、器材 1、试管（容量25ml以上） 2、恒温水浴箱 3、72型分光光度计 4、马铃薯 5、移液管 6、pH试纸 7、容量瓶 8、玻璃漏斗 9、10ml小量筒 10、滤纸 11、橡皮筋、水果刀 五、操作方法 （一）、标准曲线制作 取7支试管编号为1～6，先分别加入100ug/mL、200 ug/mL、400 ug/mL、600 ug/mL、800 ug/mL、1000 ug/mL的标准葡萄糖溶液0.5mL，参比液试管中加入0.5mL蒸馏水，然后在各试管中分别加入0.5mLDNS试剂，在沸水浴中加热5min后冷却，然后各加入4mL蒸馏水，振荡均匀，测定OD540。 管号 每管糖含量（ug） 标准葡萄糖溶液 DNS试剂 反应 蒸馏水 OD540 浓度（ug/mL） 用量（mL） 用量（mL） 用量（mL） 1 50 100 0.5 0.5 沸水浴加热5min后冷却 4 2 100 200 0.5 0.5 4 3 200 400 0.5 0.5 4 4 300 600 0.5 0.5 4 5 400 80