最新生化检验项目校准-医学课件.pptVIP

go go go go go go go go go go 非线性法：又称非直线性校准法 非线性法包括logit-log法、指数函数法、样条函数法等方法 Logit-log3p对数函数法中的一种，适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P表示参数之意，由3个参数（S1Abs、k、a）参与计算。S1Abs表示试剂空白，K表示校准所得斜率，a表示近似常数。 logit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。 样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的吸光度连接起来（点对点），形成一个完整曲线，即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。 logit-logXp与样条函数法 抛物线型(左下图)，则多考虑用logic方法拟合。 曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。 校准品的选择及准备 校准品：含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法、试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统性误差。 最好为人血清基质，减少基质效应 仪器、试剂、校准品的配套性 如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质 要有明确的不确定度 冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出样本，置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化，温和混匀。 冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室温（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温下使之完全溶解，温和混匀。 应按厂家提供说明书操作。 校准品浓度水平及个数选择 校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。 校准范围也定义为分析方法的工作范围。 个数要与仪器要求相匹配 案例分析 一、现象： 　　某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），校准无法通过，出现“校准失败”的报警。 试剂参数为：Primary wavelength：340nm；　　　　　 Secondary wavelength：700nm； Main read time：31-33；  Blank read time：26-28；  Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul； Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3；  浓度分别设置为：0、10、33umol/L。 二、了解情况： 查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实际在该仪器上已做出测定，分别为：0：-0.0027 10：-0.0344 33：-0.0738，但参与最终结果计算的Cal Factor（校准因数）却显示为0，说明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合，故出现“校准失败”报警。 三、处理： 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 把参数中校准品个数修改为：5； 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准顺利通过，结果如下： ? 0 umol/L 5 umol/L 10 umol/L 16.5 umol/L 33 umol/L Cal Factor ? -87.2 -213.5 -279.6 -365.3 吸光度 -0.0032 -0.0195 -0.0366 -0.0558 -0.0744 5、之后校准显示通过，质控在控，证明校准成功 四、分析： 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。 通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。 若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进行两点校准即可。 若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品进行多点校准。 5.不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品个数是不同的。 例如： 日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的校准品即可进行非线性拟合； 贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的校准品才进行非线性拟合。 五、总结： 我们在进行新项目实验前，除了选择正确的校准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选