液相色谱—质谱联用的原理及应用课件.ppt

分子量测定失败的原因 a）流动相不合适 b）不挥发性盐的影响 c）成分复杂，杂质太多 d) 样品浓度不够 e）pH值不合适 f）样品在源内分解或碎裂 进行MS/MS的仪器从原理上可分为两类 第一类仪器利用质谱在空间中的顺序，是由两台质谱仪串联组装而成。即前面列出的串列式多级质谱仪。 第二类利用了一个质谱仪时间顺序上的离子储存能力，由具有存储离子的分析器组成，如离子回旋共振仪（ICR）和离子阱质谱仪。但不能进行母离子扫描或中性丢失。 串联四极质谱仪(MS/MS) ： 三重四极（QqQ） 离子源→第一分析器→碰撞室→第二分析器→接收器 MS1 MS2 Q1 q2 Q3 QqQ仪器可以方便的改变离子的动能，因此扫描速度快，体积小，常作为台式进入常规实验室，缺点是质量范围及分辨率有限，不能进行高分辨测定，只能做到单位质量分辨。（通过高分辨能得到化合物的分子式） 在液质联机中使用的碎片化手段，能量都是以碰撞的形式输送给分子离子，这个能量足以使得处在能量亚稳态分子中的某些化学键断裂并使一些特定的分子发生结构重排。 碰撞诱导解离CID质谱： 选择一定质量的离子作为母体离子，进入碰撞室，室内充有靶子反应气体(碰撞气体： N2、He、Ar、 Xe、CH4等) ，发生离子—分子碰撞反应，从而产生‘子离子’，再经MS2的分析器及接受器得到子离子质谱，一般称做CID (collision-induced dissociation)谱 影响CID质谱的因素： 较大影响的因素有：所用碰撞气体的种类，压力，离子的能量，仪器的配置以及离子电荷状态 由于在不同的仪器上不可能在完全相同的条件下去分析样品，任何一个给定的化合物将在不同的条件下给出差别或大或小的质谱，尤其是各个离子峰的相对丰度的差别几乎是无法避免的。因而目前尚难以建立商品化的谱库供检索使用，只能进行人工解析或自己建库。 大气压电离技术中产生的离子为偶数电子离子，其主要的碎片应由化学键的诱导断裂和重排反应来产生，所以在EI质谱解析中总结出的偶数电子离子的开裂规则一般可适用于CID质谱的解释。 化合物鉴别 全扫描方式（Q1扫描） 全扫描数据采集可以得到化合物的准分子离子，从而可判断出化合物的分子量，用于鉴别是否有未知物，并确认一些判断不清的化合物，如合成化合物的质量及结构。 子离子分析（ MS/MS ） 子离子，用于结构判断(得到化合物的二级谱图即碎片离子)和选择离子对作多种反应监测（MRM）。 子离子谱图与锥体电压断裂谱图（源内CID）可能十分相似，所不同的是子离子质谱图已知只有一种质量通过MS1，因此也已知所有碎片离子都是由我们所选定的母离子所产生的，所以我们更相信由MS/MS产生的谱图的纯度。 各种扫描方式的原理解释： Q1 Full Scan (Start – Stop)(Q1全扫描) Q1 always used as single MS analyzer Used primarily for ident. of precursor ion 目标化合物分析 （1）选择离子监测（SIM） SIM用于检测已知或目标化合物，比全扫描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的方式一般用在定量目标化合物之前，而且往往需要已知化合物的性质。 若几种目标化合物用同样的数据采集方式监测，那么可以同时测定几种离子. SIM - Selected Ion Monitoring(选择离子监测) Used to optimize analyzer for specific ions SIM used for quantitative analyses Q1 SIM used to “optimize” precursor ion Maximize signal in preparation for MS/MS （2）母离子扫描 母离子分析可用来鉴定和确认类型已知的化合物，尽管它们的母离子的质量可以不同，但在分裂过程中会生成共同的子离子，这种扫描功能在药物代谢研究中十分重要。 Precursor Ion Scan(母离子扫描) Q1 sweeps a given mass range, Q3 is fixed Used to determine the “origin” of particular product ion(s) created in the collision cell Frequently used for drug metabolite identification (common pro