植物原生质体融合技术.ppt

C、细胞杂种的鉴定 （1）杂种植物形态特征、特性鉴定 （2）杂种植物的核型分析 （3）同工酶分析 （4) 分子标记鉴定： RFLP鉴定、RAPD 标记鉴定 几种细胞融合成功的例子 融合生物种类 细胞来源 成功年代 烟草两个种间 叶——叶 1972 甘蓝——青菜 叶——根 1972 大豆——马唐草 愈伤组织——叶 1972 矮牵牛——龙面花 叶——花瓣 1973 大麦——花生 种子——种子 1974 大麦——大豆 叶——悬浮细胞 1974 小麦——矮牵牛 叶——花瓣 1974 玉米——大豆 叶——悬浮细胞 1974 大豆——野碗豆 悬浮细胞 ——悬浮细胞 1974 大麦——蚕豆 叶——根 1975 大豆——草香木犀 悬浮细胞 ——叶 1976 酵母菌——鸡 原生质体——血红细胞 1976 大豆——烟草 悬浮细胞 ——叶 1976 人——胡萝卜 腹水癌细胞——原生质体 1976 番茄——马铃薯 叶——根尖 1978 人——小鼠 纤维肉瘤细胞——畸胎瘤细胞 1978 番茄+马铃薯 1978年德国科学家梅歇尔斯等人把马铃薯(potato)和番茄(tomato)的原生质体融合获得了体细胞杂种“泡马豆”（pomato) 培育出的“泡马豆”外型倾向于蕃茄，花叶果实具有杂种特点，遗憾的是地下部分没有长出科学家们想象中的大土豆。 THE END * 1?螢光素雙酯酸鹽(fluorosetin diacetate FDA)法，FDA本無螢光，進入細胞後被脂分解為具螢光的極性物，不能通過質膜，而留在細胞內發出螢光，因此，發出螢光的原生質體是具有活性的，不發螢光的為死細胞。2?酚藏花紅(phenosafranine)：活細胞吸收染料為紅色，死細胞不吸收為白色。酚藏花紅的濃度為0.01%。 * * 2、原生质体的培养程序 细胞壁再生： 体积膨大，叶绿体重新排列，新的细胞壁开始合成，细胞由球形变成椭圆形。 细胞分裂形成细胞团： 一般在培养2-3天后细胞质增加，细胞器增殖，DNA、蛋白质等合成增加，细胞分裂，形成小的细胞团，发育成愈伤组织或胚状体。 器官形成植株再生： 从愈伤组织诱导发生 胚状体发育 3、原生质体培养成功的技术关键 原生质体的活力 影响因素：制备原生质体的方法，渗透压稳定剂种类、浓度，质膜稳定剂种类、浓度，温度和保温时间 原生质体密度 起始密度一般为104-105 个/mL 细胞壁再生速度 植物种类和取材的生理状态；培养细胞所处的时期；酶解时所用质膜稳定剂种类 原生质体培养的营养和环境 培养基 原生质体培养的环境：光照、温度、湿度 第16章 植物原生质体融合技术 Plant Protoplast Fusion 植物原生质体的制备 植物原生质体的培养 植物原生质体的融合 回顾：动物细胞融合技术简介 ◆亲本的来源 ◆融合方法 ◆融合细胞的筛选 ◆融合细胞的克隆 ◆融合细胞的鉴定 三、植物原生质体的融合 1、植物细胞融合的概念和意义 2、植物细胞融合的程序 3、诱导细胞融合的方法及融合剂 4、细胞融合的影响因素 5、细胞杂种的选择和鉴定 1、植物细胞融合的概念和意义 细胞融合(cell fusion)概念： 又称细胞杂交(cell hybridizaion)：离体条件下用人工的方法把不同的细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。 细胞融合的意义： 克服种、属以上植物有性杂交不亲和性障碍 为携带外源遗传物质的大分子渗入细胞创造条件 2、植物细胞融合的程序 ◆ 原生质体分离的分离、纯化 ◆ 融合方法选择 ◆ 杂种细胞的