关于酶工程实验指导.pdf

螀 广东省高教厅重点实验室 —— 现代生物技术实验室教材 肇 酶工程实验技术 蒆华南农业大学 蒃 广东省教育厅现代生物技术重点实验室酶工程分室 芈 2007 年 11 月 编者的话 袆 华南农业大学现代生物技术实验室酶工程分室是由广东省高教厅和华农大投资建设的教学 提高型实验室，面向石牌地区六所高校的高年级本科生及硕士、博士研究生开设 《酶工程实验 技术 》课程。该课程以实验为主，为保证学生在修读本课程时有较好的理论基础，要求所有学 生预修“酶工程与蛋白质工程”。 薆 本课程实验内容分酶源的获取、酶制剂分离纯化及分析鉴定、酶制剂的体外改造、酶制剂 的应用和酶基因的重组表达五大部分 ， 具体如下： 薀 内容 羀 实验序 蚅 实验项目名称 号 蚆 I 、酶源的获取 羁 1，5 蒈 产淀粉酶菌株的快速筛选、木瓜蛋白酶制剂的制备 蚈 II 、酶制剂的 螅 2 莂 鸡蛋清溶菌酶的磁性亲和分离 分离纯化及鉴 定分析 膀 3 蒇 纯化鸡蛋清溶菌酶的纯度分析 袅 4 螃 纯化鸡蛋清溶菌酶的热稳定性分析 薈 5 膆 木瓜蛋白酶制剂的制备 羅 III 、酶制剂的 膄 6 莀 壳聚糖凝胶颗粒固定化木瓜蛋白酶 体外改造 艿 * 实验 8 中过氧化物酶在滤纸上固定化的部分亦属此部分内容。 肅 IV 、酶制剂的 莁 7 肂 酶反应器设计及酪蛋白水解物的制备 应用 羈 8 肅 消毒液中过氧化氢浓度的酶试纸法测定 螂 V酶基因的重组 葿 9 螆 邻苯二酚双加氧酶基因在大肠杆菌中的高效重组表达 表达 膅VI 实验总结及 膂 实验总结等。 演示等 膁 为满足课程教学的需要，经反复修改，特编写了本实验教材。本实验指导的编写由王炜军， 郭振飞，方颖、刘娥娥老师参加编写，在此一并表示感谢！ 薅 本实验指导为试用第五版， 试用后我们将根据各校修课的情况作进一步修改， 敬请兄弟院校 的同行多提宝贵意见。 芅 编者 薃 2006 年 11 月 虿 实验一、产淀粉酶菌株的快速筛选 薈 一、目的 莅学习和掌握分泌目的酶菌株的基本原理和筛选方法。 蚀 二、原理 莁 产淀粉酶的菌株能分泌淀粉酶到菌落周围的培养基中，从而水解培养基中的淀粉，由于使用的是经活性 染料标记的带颜色的淀粉（本实验为 RBV- 淀粉，呈鲜艳的紫红色），当其被淀粉酶作用后便形成可溶，且 较易扩散的小分水解物，从而在该菌落周围形成颜色较浅的透明圈。而透明圈直径与菌落直径之比则可反应 菌落分泌淀粉酶能力的高低。本方法有快速、简单易行等优点。 莇 图 1 产淀粉酶菌落形成的透明圈 蒄 三、材料、试剂和仪器 肁 1、菌的来源 衿 取不同地点的表层土壤。 肆 2 、试剂： 薄 RBV-Starch （Sigma ）,NaNO 3,K 2HPO 4 ,MgSO 4 ,KCl,2mol/LNaOH 无菌水和琼脂粉等。 蒂 3 、器皿 薁 250mL 三角瓶两个、 9.0cm 培养皿若干、涂布棒、 200 μL 移液枪、 200 μL 枪头