SFRP过表达对结肠癌细胞株HCT基因表达谱影响讲稿.ppt

谢谢！ * Wnt信号通路在胚胎发育及肿瘤发生、发展过程中起着重要作用;Wnt信号通路异常活化与结直肠癌的发生密切相关。90%以上的结直肠癌存在Wnt信号转导通路的异常激活 * 结构上与Wnt通路的受体（frizzled Fz）具有同源性 SFRP4过表达对结肠癌细胞株HCT116基因表达谱的影响 研 究 背 景 研究背景 CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179 结直肠癌的发病率 研究背景 Wnt信号通路 分泌型卷曲相关蛋白SFRP 一组分泌型糖蛋白家族 SFRPs有五个家族成员在人类组织中表达 定位于染色体8p 12～11.1 包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一个C-末端。 （除SFRP3以外） 研究背景 分泌型卷曲相关蛋白SFRP 通过与Wnt信号的蛋白质相互作用以阻止它们结合到Fz蛋白或与Fz形成无功能复合物而阻碍Wnt信号 研究背景 研 究 目 的 检测SFRP4基因转染肠癌细胞株HCT116后基因表达谱的变化，深入探讨SFRP4在结直肠癌发生中的作用机制。 技术路线 pcDNATM 3.1-SFRP4重组质粒 基因芯片检测（Pathway分析） 双酶切鉴定 WB鉴定SFRP4表达 转染HCT116后 筛选稳定表达株 结果 pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 芯片生物信息学分析 RT-PCR验证部分基因芯片的结果 pcDNA3.1载体大小为5500bp， SFRP4基因片段大小为1056bp EcoRI和HindIII双酶切重组质粒后凝胶电泳图 Western Blot 检测pcDNATM 3.1-SFRP4质粒稳定转染HCT116细胞后SFRP4的表达 0道为pcDNA3.1空载体，1和2道为pcDNA3.1-SFRP4 pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 芯片生物信息学分析 RT-PCR验证部分基因芯片的结果 GenBank ID Gene name Comments Induction-fold NM_001040056 MAPK3 丝裂素活化蛋白激酶3 4.3 NM_001006617 MAPKAP1 丝裂素活化蛋白激酶相关蛋白1 5.0 NM_002756 MAP2K3 MAPKK3 2.3 NM_007181 MAP4K1 MAPKKKK1 2.8 NM_021970 MAP2K1IP1 MAPKK1相关蛋白1 2.3 NM_021284 MEK 蛋氨酸脑啡肽 3.0 上调的MAPK家族基因 下调的TNF家族基因 GenBank ID Gene name Comments Induction-fold NM_006291 TNFAIP2 肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白2 0.25 NM_006290 TNFAIP3 肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白3 0.38 NM_014350 TNFAIP8 肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白8 0.25 NM_003844 TNFRSF10A 肿瘤坏死因子受体超家族10A 0.44 NM_003840 TNFRSF10D 肿瘤坏死因子受体超家族10D 0.5 凋亡相关基因的改变 GenBank ID Gene name Comments Induction-fold NM_000875 IGF1R 胰岛素样生长因子受体 4.9 NM_000043 FAS TNF受体超家族成员6 2.6 NM_006538 BCL2L11 Bcl2-L11 0.13 pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 芯片生物信息学分析 RT-PCR验证部分基因芯片的结果 1，细胞转染SFRP4前；2，细胞转染SFRP4后。 β-actin作为对照。 RT-PCR验证基因芯片结果 讨论 我们通过基因芯片技术对基因组进行高通量的研究，通过生物信息学分析，我们筛选出比较重要的p38MAPK信号通路相关基因、TNF家族基因和凋亡有关基因的变化来探讨SFRP4对肿瘤细胞的作用机制。 讨论 MAPK信号通路参与细胞增殖、分化及凋亡的调控，并在细胞恶性转化的病理过程中发挥重要作用 肿瘤坏死因子（TNF）家族是一类具有广泛生物学活性的分子，具有抗肿瘤、调节细胞生长分化等作用。它能直接抑制肿瘤增殖和诱导凋亡，有较强抗肿瘤的作用 结直肠癌细胞表达SFRP4后，促进凋亡和抑制凋亡的因子同时发生改变，提示其对凋亡的调控是一个复杂的过程。 * Wnt信号通路在胚胎发育及肿瘤发生、发展过程中起着重要作用;Wnt信号通路异常活化与结直肠癌的发生密切相关。90%以上的结直肠癌存在Wnt信号转导通路的异