细菌鞭毛染色及运动性观察.doc

细菌鞭毛染色及运动性观察 摘要：实验包括用压滴法制片对细菌的运动性观察；用硝酸银染色法对细菌鞭毛进行染色及观察。学习用压滴法观察细菌的运动性，掌握鞭毛染色法，观察细菌鞭毛的形态特征 关键词：压滴法 运动性 硝酸银染色法 鞭毛 前言：鞭毛是细菌的纤细丝状运动“器官”。鞭毛的有无，数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。它是原核生物实现其趋性的最有效方式，具鞭毛的细菌在液体中借助鞭毛的旋转，使菌体能定向的泳动。 鞭毛的直径一般20—30nm，只有用电镜才能直接观察到。若用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。首先用媒染剂（如单宁酸或明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用适合的方法进行染色。 1材料和方法 1.1 材料 1.1.1菌种 枯草芽孢杆菌 铜绿假单胞菌 1.1.2 溶液和试剂 无菌水 稀释美兰 95%乙醇 硝酸银鞭毛染液 香柏油 二甲苯 1.1.3 仪器和其他用品 普通光学显微镜 擦镜纸 载玻片 酒精灯 双层瓶 接种环 滴管 试管夹 1.2方法 1.2.1压滴法 （1）制片：取一个干净的载玻片，中央滴加一滴无菌水，无菌条件下取适量菌种进行涂片。加一滴稀释美兰与之混合均匀，将盖玻片一边与菌液接触，慢慢放下盖玻片。 （2）镜检：迅速用油镜镜检。 1.2.2鞭毛染色 （1）载玻片的准备：将干净的载玻片置于95?％乙醇中，用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。 （2）制片：在载玻片的一端滴一滴蒸馏水,用接种环挑取少许备用的菌种（注意不要挑上培养基）,在载玻片的水滴中轻沾几下。将载玻片稍倾斜,使菌液随水滴缓慢流到另一端,然后平放在空气中自然干燥。 （3）染色：涂片干燥后滴加A液染5分钟,用蒸馏水冲洗,用B液冲去残水。洗净A液滴加B液覆盖1min（其间可将玻片在酒精灯上稍加热）然后用蒸馏水冲洗,自然干燥。 （4）镜检：油镜镜检。 2结果与分析 2.1 实验结果 压滴法观察细菌运动性时可以看到菌体不规则快速运动，有些为转动。 鞭毛染色的两个片子油镜镜检时，找到一处菌体聚集的地方。其中枯草芽孢杆菌镜检可以看到菌体侧边及两端都有鞭毛出现，而铜绿假单胞菌只有两端出现鞭毛。鞭毛比菌体细很多，长度约为菌体的2-3倍。 2.2结果分析 图1-1枯草芽孢杆菌 图1-2铜绿假单胞菌 （1）本次实验可以看到有些菌体呈 图1 鞭毛染色的油镜观察（10*100） 快速运动，因为实验所用菌种都具鞭毛，可以看到鞭毛在细菌运动方面的作用。 （2）可以看到有很多菌体静止不动，可能制片时杀死了菌体；还有些菌体运动状态完全一致，有可能是死掉的菌体在随水流在动而不是自己运动。 （3）枯草芽孢杆菌为周生鞭毛，因此在其端部和体侧都可以观察到鞭毛；而铜绿假单胞菌鞭毛属端生，所以只能在其端部看到鞭毛。 3小结 细菌运动性的观察中要注意动作迅速，滴加稀释美兰后迅速盖上盖玻片（当然要注意不要有气泡）后镜检，因为稀释后的美兰对细菌还是有刺激的，时间久了造成菌体大量死亡就无法观察其运动性了。 应选用活跃生长期的菌种，老龄菌种鞭毛易脱落。 载玻片必须清洁光滑无油迹，否则菌体纠缠无法观察且染色背景很脏；同时，鞭毛染色时一定要充分洗净A液后再加B液,否则背景也会很脏。 参考文献 沈萍，陈向东. 微生物学实验【M】. 4版. 北京：高等教育出版社，2007.