CN105532468A一种通过绒毛白蜡体胚诱导获得再生植株的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 105532468 A (43)申请公布日 2016.05.04 (21)申请号 201610015672.9 (22)申请日 2016.01.11 (71)申请人 山东省林业科学研究院 地址 250014 山东省济南市历下区文化东路 42号 (72)发明人 燕丽萍 刘翠兰 吴德军 李丽 王开芳 藏真荣 (74)专利代理机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 37221 代理人 李健康 (51)Int.Cl. A01H 4/00 (2006.01) 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 (54)发明名称 一种通过绒毛白蜡体胚诱导获得再生植株的 方法 (57)摘要 本发明公开了一种通过绒毛白蜡体胚诱导获 得再生植株的方法，是以绒毛白蜡成熟种子胚的 胚根为外植体，在MS盐分+B5有机+2mg·L –16-苄 –1 – 基腺嘌呤(BA)+0.1mg·L 萘乙酸(NAA)+30g·L 1 –1 glucose+5.0g·L agar的诱导培养基和MS盐分 –1 –1 +B 有机 +30g·L glucose+5.0g·L agar 萌发 5 培养基上诱导出体细胞胚并获得再生植株。实 验证实体胚诱导率为 59.8％，体胚萌发率高达 81.2％，本发明方法为绒毛白蜡转基因育种工程、 优良无性系工厂化育苗和种质资源保护等提供和 建立了成熟稳定的技术体系。 A 8 6 4 2 3 5 5 0 1 N C CN 105532468 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种通过绒毛白蜡体胚诱导获得再生植株的方法，步骤是： (1)选取颗粒饱满的种子剥除外种皮后置于三角瓶中，流水冲洗2–3小时，用75％乙醇 浸泡1分钟，再用0.1％的升汞消毒8–10分钟，无菌水冲洗4–5次后，将消毒后的种子在超净 工作台上接种到MS种子萌发培养基上，萌发2–6天； (2)取萌发的胚根为外植体，接种在体细胞胚诱导培养基上，暗培养后，获得胚性愈伤 组织； (3)将暗培养后的胚性愈伤组织转移到体胚萌发培养基上，进行光照培养，诱导出体胚 苗； (4)将体胚苗转移到试管苗复壮培养基，光照培养10–14天后，转入生根培养基继续光 照培养； (5)将步骤(4)获得的生根植株炼苗，移栽； 其特征在于： –1 步骤(2)中所述的体细胞胚诱导培养基配方为：MS盐分+B 有机+1.8–2.2mg L 6-苄基 5 · –1 –1 –1 腺嘌呤(BA)+0.08–0.12mg L 萘乙酸(NAA)+30g L 葡萄糖+5.0g L 琼脂，pH值5.2– · · · 5.4； –1 –1 步骤(3)中所