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鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价 目的 1、掌握鸡新城疫的临诊要点。 2 、了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和 免疫监测技术。 内容 1、鸡新城疫的临诊要点。 2、鸡新城疫的实验室诊断。 NDV 的分离及鉴定； NDV毒力的鉴定 3、鸡新城疫的免疫效果评价 鸡新城疫的免疫监测 血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI) 血凝试验 （HA）和血凝抑制试验 (HI) HA和HI 的原理 ⒈HA试验 ：许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞表面受 体结 合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象 。 2.HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制， 称HI试验。 一、鸡新城疫的血凝试验 (HA) • 【材料】 • 新城疫病毒鸡胚接种尿囊液 1份 • 0.5 ％鸡血球悬液 1管 • 生理盐水或PBS 1瓶 • 96孔微量血清盘 1块 • 微量加样器 1支 一、鸡新城疫的血凝试验 (HA) • 【方法与步骤】 （一）制备鸡红细胞悬液： 1.用注射器抽取抗凝剂。 2.用上述注射器，采用无菌法抽取健康的未免疫鸡 的静脉血。 3.混匀，加生理盐水适量，洗涤离心，共离心三次 （第一、二次2000转/分5分钟、第三次3000转/分 5分钟）洗去血清及白细胞。 ⒋ 取纯红细胞0.6m l，加生理盐水稀释99.4m l，即 成1%的鸡红细胞悬液。 一、鸡新城疫的血凝试验 (HA) （二）加样 1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50L 生理盐水。 2. 于左侧第1孔加50L病毒液，混合均匀后，吸 50L至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50L ； 第12孔为红细胞对照。 3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50L ， 在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果。 一、鸡新城疫的血凝试验 (HA) • 【病毒血凝试验的操作方法 （单位：L ）】 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 病毒稀释 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照 度 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 生理盐水 病毒液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 0.6%红细 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 胞 微型振荡器1m in，静置30m in 弃50 结果观察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + - - 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位 一、鸡新城疫的血凝试验 (HA) • 【 结果判定 】 • 置于振荡器上振荡1分钟，静置后30 min开始观察结果，待对照孔 红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底， 平铺呈网状，即为100% 凝集 （++++），不凝集者 （-）红细胞沉 于孔底呈点状。 • 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单 位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的