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实验二:层析练习
一、实验目的
1、学习层析法的原理和方法;
2、掌握比移值的计算方法,了解比移值
的影响因素;
3、掌握薄层层析的一般操作和定性鉴
定方法。
二、实验原理
薄层色谱常用TLC表示,依照采用的薄层材料性质和物
理、化学原理的不同,可分为吸附薄层色谱、分配薄层色谱、
离子交换薄层色谱和排阻薄层色谱等。
吸附薄层色谱采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层,将样
品以毛细管点在原点处,用移动的展开剂将溶质解吸,解吸出
来的溶质随着展开剂向前移动,遇到新的吸附剂,溶质又会被
吸附,新到的展开剂又会将其解吸,经过多次的解吸-吸附-解
吸的过程,溶质就会随着展开剂移动。吸附力强的溶质随展开
剂移动慢,吸附力弱的溶质随展开剂移动快,这样不同的组分
在薄层板上就得以分离。一个化合物在吸附剂上移动的距离与
展开剂在吸附剂上移动的距离的比值称为该化合物比移值Rf 。
展开剂是影响色谱分离度的重要因素。一般来说,展开剂的极性越大,对特
定化合物的洗脱能力也越大,一般常用展开剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:
石油醚己烷 甲苯苯氯仿乙醚THF乙酸乙酯丙酮乙醇 甲醇水乙酸。
三、实验步骤
1.制板:
将硅胶加 1% CMC,调成桨状(硅胶:CMC 1:3~4) (在平铺玻璃板上能晃动
但不能流动),将其涂在载玻片上 (100mm ×25mm)),为使其坦平,可将载
玻片用手端平晃动,至平坦为止,放在干净平坦的台面上,晾干之后放入105℃烘
箱活化1小时,取出放入干燥器内待用。
2、叶绿素的提取
在研钵中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以.如果是冷冻的,解
后包在纸中轻压吸左水分)。加人10mL2:1石油醚和乙醇混合液,适当研磨。将
取液用滴管转移至分液漏斗中,加人10 mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除
水溶性物质,分去H2O层,再用蒸馏水洗涤两次。将有机层转入干燥的小锥
瓶中,加2g入无水Na2SO4干燥。干燥后的液体倾至另—锥形瓶中(如溶液颜色
浅,可在通风柜中适当蒸发浓缩)。
3、点样
用一根内径 1mm的毛细管,吸取适量提取液,轻轻地点
在距薄板一端1.5cm处,平行点两点,两点相距1cm左右。若
一次点样不够,可待样品溶剂挥发后.再在原处点第二次,但
点样斑点直径不得越过2mm。
手动点样机 自动点样机
4 、展开
先在层析缸中放入展开剂[石油醚 (60~90℃ )-丙酮— 乙醚(体积
比为3:1:1)] ,加盖使缸内蒸气饱10min, 再将薄层板斜靠于层析缸
内壁。点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中,密闭层祈缸。
待展开剂上升到距薄层板另一端约1crm时,取出平放,用铅笔或
小针划前沿线位置,晾干或用电吹风吹干薄层。
四、实验结果
展开剂 展开剂距离 样品编号 样品点距离 Rf 成份
1
2
3
五、实验思考
1、薄层色谱有哪些常见的用途?
2、影响Rf值的主要因素有哪些?
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