高效液相色谱法164教学提纲.ppt

高效液相色谱法; 前言:;我国：;参考书籍：;本课程基本要求：;第一章 高效液相色谱法基本原理;色谱法的发展;;二、色谱法概述 ;高效液相色谱法的特性:;液相色谱仪;;三、色谱法原理;分离原理:; 当混合物进入色谱柱后，就在固定相、流动相之间不断地进行分配平衡。不同的化合物，分子结构不同，理化性质不同，所以在两相中存在的浓度也各不相同。固定相中存在量多的化合物，冲洗出柱子的时间就长，反之则短。这与分配系数K有关： K值小，先流出柱子，K值大的，保留作用强，后流出柱子。;四、高效液相色谱法的特点;高速 所需的分析时间较经典液体色谱少得多（交换速度快），流量可达l—10mL／min ;高灵敏度 ①紫外检测器的最小检测量可达(10-9 g)； 荧光检测器的灵敏度可达10-11g。 ②所需试样很少；微升数量级 高选择性 可分离不同类型化合物和异构体，也可分析在性质上极为相似的化合物 (同位素、同分异构体、空间异构体、手性化合物）;五、HPLC与GC区别 ;2．流动相的区别 GC：流动相为惰性，组分与流动相无亲合作用 力，只与固定相有相互作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用 力，能提高柱的选择性、改善分离度. 对分离起主要作用。 3．操作条件差别 4.分析样品区别 GC：加温操作 GC：破坏样品，不能回收 HPLC：室温；高压 HPLC：不破坏样品，能回收 说明：气相、液相地位同样重要 两种互补不足的色谱方法 灵敏度：气相﹥液相 应用范围：液相﹥气相;六、色谱法的分类;§１－２　基本概念 一、色谱图（chromatogram）;;色谱过程特点：;常用术语： 1. 基线 : 仅有纯流动相进入检测器时的流 出曲 线。 2.色谱峰: 响应信号大小随时间变化所形成的峰 形曲线。(正态分布);峰面积： 峰与峰底之间的面积 ，用A表示。 二、色谱保留 ;2.分配系数K;分配系数K 的讨论;3.容量因子k’ (capacity factor) ;4. 容量因子与保留时间的关系 ;组分和流动相通过长度L的分离柱，需要时间分别为tR和t0，则 tR = to(1+k’);作业：;5. 选择性系数α;色谱理论需要解决的问题？;§1-3 色谱柱的分离效率;;;理论塔板高度H;说明：;塔板理论的特点和不足：;(3)塔板理论无法解释同一色谱柱在 不同的流动相流速下柱效不同的 实验结果，也无法指出影响柱效 的因素及提高柱效的途径。;二.峰扩展和速率方程式;柱外因素;2. 速率方程式（范·弟姆特方程式）;A ─涡流扩散项;B/u —分子扩散项;C ·u —传质项;;3. 速率理论的要点:;(3) 为色谱分离和操作条件选择提供了理论指导。阐明了流速和填料对柱效及分离的影响。 (4) 各种因素相互制约：流速增大，分子扩散项的影响减小，使柱效提高，但同时传质阻力项的影响增大，又使柱效下降； 选择最佳条件，才能使柱效达到最高。 ;4.获得高柱效的几种方法：;5. 影响分离的因素与提高柱效的途径 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略不计，即 H = A + C u;§１－４　分离度;讨论：;;一．分离度的表达式：;对浓度不同组分而言：;二．分离度影响因素 ①峰的宽度（峰宽越小， Rs越大） 峰的宽窄主要反映了色谱分离的动力学特性 ②两峰的保留时间之差（△tR越大， Rs越大） 反映了色谱分离的热力学特性 分离度基本 关系式： ;四．控制分离度方法;②更换色谱柱（改变N）;③改变选择性系数;五. 分离度控制的一般原则:;作业：;第二章 仪器装置 四大部件： 高压输液泵 进样器 高效分离柱 检测器 ;§2－1 高压输液泵 作用：向色谱柱输送一个连续、恒定的移动相。 一、对泵系统的要求 1.使用方便（易调节流量、过压保护等） 2.更换洗脱液容易、死体积小 3.有最大工作压力(20MPa，130MPa) 4.一定流量范围（直径小，流量小；速度快，流量大。）（0.1~10ml/min) 5.流量稳定性好(流量噪声、流量波动、流量漂 移） 6.流量精度高;机械往复式柱塞泵的工作原理：;特点：;梯度淋洗装置;泵系统发展趋势;§2－2 色谱柱; 柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。减小填料粒度和柱径以提高柱效。;柱效的影响因素;§2