广泛靶向代谢组学技术参数.doc

PAGE PAGE 1 广泛靶向代谢组学技术参数 一 基本功能要求 1.1 服务范围： 广泛靶向代谢组 1.2 检测平台：ABSciexQTRAP?6500+UPLC-MS/MS 1.3 实验流程：样本采集及处理，代谢物提取，代谢物检测，数据预处理，数据质控，代谢物鉴定注释，差异代谢物分析 1.4 数据质控：1.空白（监测仪器背景信号），2.混合标准品（监测仪器稳定性），3.混合样品即QC样品（监测仪器及实验操作稳定性） 1.5 数据分析： 主成分分析（PCA）：采用多元统计分析，可以在最大程度上保留原始信息的基础上将高维复杂的数据进行简化和降维。 聚类分析：按照个体或样本的特征将其分类，使同一类别内的个体具有尽可能高的同质性，类别之间具体尽可能高的异质性。代谢物含量数据采用极差法进行归一化处理，对代谢物在不同样本间的积累模式进行聚类分析。 重复相关性分析：可用于观察组内样品之间的生物学重复，同时组内样品对组间样品的相关系数越高，获得的差异代谢物越可靠。将皮尔逊相关系数作为生物学重复相关性的评估指标。r2越接近1，说明两个重复样本相关性越强。 正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）：与PCA相比，偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）可以使组间区分最大化，有利于寻找差异代谢物。正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）结合了正交信号校正（OSC）和PLS-DA方法，可去除不相关的差异来筛选变量。 5.差异代谢物KEGG功能注释及富集分析：KEGG数据库有助于研究者把基因、表达信息以及代谢物含量作为一个整体网络进行研究。差异代谢物在体内相互作用，形成不同的通路。利用KEGG数据库对差异代谢物进行注释，根据差异代谢物结果，进行KEGG通路富集。 二 具体参数要求 1.液相色谱：UPLC 2.质谱：ABSciexQTRAP?6500+或性能更优质谱 3.质谱条件：正离子模式（ESI+）、负离子模式（ESI-） 4.检测模式：多反应监测模式（MRM） 5.单个样本检测时间≤15min 6.数据库：拥有自建标品数据库达1000种以上物质 7.在血液样品中一次性定性、半定量代谢物达500种以上 8.数据分析内容：主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）、聚类分析、重复相关性分析、差异代谢物KEGG功能注释及富集分析 9.质控要求：混合标准品中80%以上数据CV≤30%；混合样品中90%以上数据CV≤50%或75%以上数据CV≤30% 10.项目周期：3个月以内