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菌种的保藏;菌种保藏的意义;概念;法国生物梅里埃公司提供的商业派生菌株;保藏的标准储备菌株;制备的工作菌株;菌种在培养或保藏过程中,由于自发突变的存在,出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象,称为菌种的衰退。
菌种衰退不是突然发生的,而是从量变到质变的逐步演变过程。开始时,在群体细胞中仅有个别细胞发生自发突变(一般均为负变),不会使群体菌株性能发生改变。经过连续传代,群体中的负变个体达到一定数量,发展成为优势群体,从而使整个群体表现为严重的衰退。;菌种衰退的原因;如何预防衰退;菌种的复壮;复壮的方法;菌种保藏的基本原理;选择保藏方法时,首先应考虑方法能否长期地
保持菌种原有的特性,同时也应兼顾到方法的经济
和简便。在实际工作中,往往多种条件同时使用,
以提高保藏效果。
(二)菌种保藏步骤
① 挑选特征典型的纯菌菌落;
②确定保藏的合适菌体形态;
③ 选择最适宜的保藏方法;
④定期对保藏菌种进行检查,观察是否发生变化,若有变化,须改变保藏方法。保藏期满应及时进行移种。
;1.琼脂斜面低温保存法 ;大肠杆菌斜面 金黄色葡萄球菌斜面;各类菌种保藏条件及时间;(3)特点:
优点是——简便,易于推广;一般不需要另选择保藏用培养基;对大多数微生物都适用。
缺点是——保藏期太短;传代次数多,易发生变异及污染。
;(4)注意事项:
保藏的菌种应是生命活力旺盛的新鲜培养物,至少应是第三代的培养物。
保藏时,破伤风杆菌可用庖肉培养基;生孢梭菌用流体硫乙醇酸盐培养基。
必须定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉,如有异常应及时处理。
每次移植后,应与原菌种的编号、名称逐一核对,确证培养基特征和纯度无误后再继续保藏。
保藏菌种的培养基应无糖,其他菌类含糖小于 2 %为宜,以免产酸过多,影响菌种存活。
铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡,不宜用本法保存。
; 2、液体石蜡保存法: 本法是用石蜡将培养物与空气隔绝,以降低菌种的生理生化水平,并可防止水分蒸发,从而延长菌种的保藏期。; 将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内,液体石蜡液面以高出培养基最上端 1 ㎝为宜,将试管直立,放入4℃冰箱中保藏。
适用范围:适用于保藏部分霉菌,酵母菌和放线菌,对细菌保藏效果较差。 ;液体石蜡对各类菌种保藏效果;(3)特点:
本方法简便易行,是实验室常用的一种保藏方法,
该法主要使菌种与空气隔绝。
(4)注意事项:
① 保藏时,用新鲜培养物接种,应检查纯度和特征
后,方可进行保藏。
② 保藏过程中,需经常观察斜面是否干燥,如干燥,
需重新移种。
③ 使用菌种时,先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一
边,再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培
养,待长出新培养物后,再移种一次到新斜面上
即可使用。;④将沾有少量液体石蜡的接种针浸于95%酒精中片刻,再烧灼灭菌,以免直接在酒精灯下烧灼时,液体石蜡四溅,引起污染。
⑤液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度要严格控制,如太多,会影响菌种交换气体,使保藏效果不好;如太少,斜面容易干燥,将缩短保藏期。一般以高出斜面1 ㎝为宜。??????
⑥制备无菌液体石蜡时,每管装量不能太多,否则分装到菌种培养基中易造成污染。
;谢谢大家
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