水中细菌总数的检测.pdf

水中细菌总数的检测 1. 实验目的 1、学习并掌握水的细菌学检测方法 2 、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。 2. 菌落总数 standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上、 有氧条件下 37 °C 培养 48 h 后，所得 1 mL 水样所含菌落的总数。 细菌 总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污 染。由于结果不能说明污染的来源， 因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。 3. 培养基与试剂 2.1 营养琼脂成分 2.2 制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整 pH 为 7.4~7.6 ，分装于玻璃容器中 （如用含有较多杂质的琼脂， 应先过滤。 ），经 103.43 kPa （121° C,15 lb）湿热灭菌 20 min ，储存于冷暗处备用。 4. 仪器和材料 仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。 材料：灭菌 平皿（直径 9 cm ）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、 试管架等。 放大镜或菌落计数器、 pH 计或精密 pH 试纸、火柴或打火机。 5. 样品采集 自来水的取样： 先将自来水龙头用酒精棉擦拭， 再用酒精灯火焰灭菌， 打开龙头放水 3-5 min ， 用无菌空三角瓶接取水样 200 ml 。 纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水 样 200 毫升。 地表水的取样：应取距水面 10— 15 cm 的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸 入水中， 然后翻转过来， 除去玻璃塞， 水即流入瓶中， 盛满后， 将瓶塞盖好， 再从水中取出， 最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 6. 检验步骤 生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 1 mL 充分混匀的水样， 注入灭菌培养皿中， 倾注约 15 ml 已融化并冷却到 45 °C 左右的营养琼脂培养基， 并立即旋 摇平皿， 使水样与培养基充分混匀。 每次检验时应做一平行接种， 同时另用一个平皿只倾注 培养基作为空白对照。 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于 36 °C±1° C 条件下连续培养 48 h ，进行菌 落计数，即为 1 ml 水样中的菌落总数。 水源水： 以无菌操作方法吸取 1 ml 充分混匀的水样， 注入盛有 9 ml 灭菌生理盐水的试管中， 混匀呈 1:10 稀释液。 吸取 1:10 稀释液 1 ml，注入盛有 9 ml 灭菌生理盐水的试管中，混匀呈 1:100 稀释液。按同 法依次稀释成 1:1000 、1:10000 稀释液备用。如此递增稀释一次，必须更换一支刻度吸管。 用灭菌吸管吸取 1 ml 未稀释的水样和 2~3 个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌培养皿内， 其余操作同 6.1 生活饮用水的检验步骤。 7. 菌落计数及报告方法 作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。在记下各平皿的 菌落数后， 应求出同稀释度的平均菌落数， 供下一步计算时应用。 在求同稀释度的平均数时， 若其中一个平皿有较大片状菌落产生时， 则不宜采用， 而应以无片状菌落产生的平皿作为该 稀释度的平均菌落数。 若片状菌落不到平皿的一半， 而其余一半中菌落数分布又很均匀， 则 可将此半皿计数后乘 2 以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数