《培养基制备的基本方法和注意事项》.docxVIP

培养基制备的基本方法和注意事项 1.培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严 格按其规定进行配制外.一般均应尽量收集有关资料.加以比较核对.再依据自己的使 用目的加以选用，记录其来源。 2 .培养基的制备记录 每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源.和各种成份的牌号。最 终pH值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备 查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 培养基成分的称取 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱.最好一次完成，不要中断。可将配 方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置 于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后.还应进行一次检查。 培养基各成份的混合和溶化 培养基所用化学药品均应是化学纯的。 使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅， 以防有微量铜 或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化.也可放入大烧杯或 大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。 在锅中溶化时、可先用温水 加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。 待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化.迄至煮沸。如为琼脂培 养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混 合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 培养塞pH的初步调整 培养基各成分完全溶解后， 应进行pH的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH会 有所变化，例如，牛肉浸液约可降低 pH0.2.而肠浸液pH却会有显著的升高。因此， 对 这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终 pH ,保证培养基的 质量。pH调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。 培养基的过滤澄清 液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其 它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法， 滤纸应拆叠成折扇成漏 斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。 琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。 亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过 滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。 如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至 55-60 C的培养基放入 大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的 1/ 2 ,每1000ml培养基加入1-2个鸡 蛋的蛋白.强力振摇 3-5分钟，置高压蒸汽灭菌器中、 121 C加热20分钟、取出趁热 以绒布过滤即可。 若能自行沉淀者，亦可静置冰箱中 1-2日、吸取其上清液即可。 培养基的分装 培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得 超过容器装盛量的 2/ 3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还双用防水纸包扎 （现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装 琼脂抖面培养基时， 分装量应以能形成 2 / 3底层和1/ 3斜面的量为恰当。分装容器应 予先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装 20ml 培养基于一小玻瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终 pH之用。 培养基的灭菌 一般培养基可采用121 C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中， 如 无特殊规定，即可用此法灭菌。 某些畏热成分，如糖类，应另行配成20%如或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒， 以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体 液和抗生素等则应从无菌操作技术抽取和加入于经冷却约 50 C左右的培养基中。 琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至 55-60 C时，摆置成适当斜面、待其自然 凝固。 培养基的质量测试 每批培养基制备好以后.应仔细检查一遍：如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被 培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终 pH。 将全部培养基放入 36 土 1C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。 用有关的标准菌株接种 1-2管或瓶培养基，培养24- 48小时，如无菌生长或生长不好。 应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。 培养基的保存 培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板 培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制各记录副页或明显标签。 培养基的常规配制程序 一、 目的要求 了解培养基的配制原理。 了解培养基常规配制程序。 了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。 二、 基本原理