分子生物学分子隆技术.ppt

基因操作技术及其应用  参考书目资料 《分子克隆实验指南》(第三版):美萨姆布鲁分魔= GENES 科学出版社,2008 《 Gene IX》: Benjamin Lewin编著. 《基因工程原理》:吴乃虎,科学出版社,1998 《分子生物学实验指导》:郜金荣,叶林柏,武汉大学出版社,2007 ■《基因工程》:张惠展,华东理工大学出版社,2005  genote chromesarres --genes---.-- Genes instrutions DNA for making proteins proteins Proteins act alone perform many cellular functions From genes to Proteins  基因工程 基因工程是指在微观领域(分子水 平)中,根据分子生物学和遗传学 原理,设计并实施一项把一个生物 体中有用的目的DNA遗传信息)转 入另一个生物体中,使后者获得新 的需要的遗传性状或表达所需要的 产物,最终实现该技术的商业价值。 ■基因工程的基本特点是,分子水平 因工与道究工 操作,细胞水平表达。  基因工程的核心技术是DNA重组技术 重组DNA技术的重大突破带动了现代生物技术的兴起,并 很快产生了许多生命科学的高技术产业 ■重组DNA技术,又称为基因或分子克隆技术,是基因工程 的核心技术。该技术包括了一系列的分子生物学操作步骤。 6  分子克隆技术 又称为重组DNA技术,是指将一种生物体(供体)的基因与载体在 体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体)内,使之按照人 的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序 供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。 插入的外 ◎ 质粒载 收体外源 重组DNA分子 直组体 转化或转染 转化 (o),(G体 883,通姐DN人增殖 筛选 后在固 体培养基生长 o⑨o)0 弹选含重组 质粒的幗菌  (1)获得目的基因; (2)与克隆载体连接,形成新的重组 DNA分子; (3)用重组DNA分子转化受体细胞 并能在受体细胞中复制和遗传; (4)对转化子筛选和鉴定 (5)对获得外源基因的细胞或生物体 通过培养,获得所需的遗传性状或 表达出所需要的产物 转基国动物转基因植物 产物(  获得需要的目的基因(外源基因) 获得需要的目的基因常用的方法 (1)直接从生物体中提取总DNA,构建基因文库( gene library),从中调 用目的基因; (2)以mRNA为模板,反转录合成互补的DNA片段; (3)利用聚合酶链式反应(PCR)特异性地扩增所需要的目的基因片段 等等。  细胞内总DNA的提取分离与基因文库的构建 田胞内总DNA的提取分离程序 取上清 加入等体积 反复颠倒 超声波破 除上清湾 洗涤 加入等体积 反复颠倒混 放置过夜