电泳技术-聚丙烯酰胺凝胶电泳.pdf

电泳技术 第一节 电泳技术概述 第二节 常见电泳技术 第二节 常见电泳技术 一 纸电泳和醋酸纤维薄膜电泳 二 聚丙烯酰胺凝胶电泳 三 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 四 琼脂糖凝胶电泳 六 等电聚焦电泳 五 梯度凝胶电泳 七 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳 八 印迹电泳 九 毛细管电泳 二、聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ） 聚丙烯酰胺凝胶是由 单体 丙烯酰胺 (acrylamide，简称Acr) 和交联剂 N ，N- 甲叉双丙烯酰胺 (m ethylene-bisacrylamide,简 称Bis)在加速剂 和催化剂 的作用下聚合并联成 三维网状结构 的 凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。 polyacrylamide gel electrophoresis，简称 PAGE PAGE 应用范围广，可用于蛋白质、酶、核酸等的 分离、定性 、定量及少量的制备，测定相对分子质量、等电点 等。 1、聚丙烯酰胺凝胶的特点 ①可用于分离不同分子量的生物大分子 聚 ②更高的灵敏度： 10－9～10－12 mol/L 丙 烯 ③化学惰性好，电泳时不会产生 “电渗 ” 酰 胺 ④电泳分离的重复性好 凝 ⑤透明度好，便于照相和复印 胶 的 ⑥机械强度好，有弹性，便于操作和保存 特 ⑦无紫外吸收 点 ⑧可用作固定化酶的惰性载体 2、凝胶聚合的原理及有关特性 凝胶单体 加速剂 （1）聚合反应 丙烯酰胺 四甲基乙二胺 Acr TEMED 交联剂 N，N- 甲叉双丙烯酰胺 Bis 催化剂 过硫酸铵 (AP) 或 核黄素 （2 ）凝胶孔径的可调性及其有关性质 ①凝胶性能与总浓度及交联度的关系 a b T(Acr 和Bis总浓度 ) （% ）= 100 m