荞麦胰蛋白酶抑制剂α-螺旋区氨基酸对抗肿瘤活性的影响.pdf

目 录 中 文 摘 要I ABSTRACTIII 第一章 文献综述1 1.1 线粒体功能1 1.1.1 线粒体功能障碍1 1.1.2 线粒体功能障碍相关疾病1 1.1.3 线粒体靶向分子研究2 1.2 线粒体蛋白转运2 1.2.1 线粒体蛋白转运特点及相关转运因子2 1.2.2Tom20 的结构与功能4 1.3 研究目的与意义7 第二章 Tom20胞内区的原核表达与纯化8 2.1 引言8 2.2 实验材料、试剂及仪器8 2.2.1实验材料、试剂8 2.2.2 实验仪器8 2.3 实验方法9 2.3.1rTom20 的构建9 2.3.2rTom20 的原核表达与纯化 12 2.4 实验结果13 2.4.1rTom20 目的基因成功扩增 13 2.4.2pGEX-4T-1-Tom20 阳性克隆鉴定 14 2.4.3rTom20 的表达与纯化 15 2.5 讨论16 第三章 rBTI螺旋区多肽与rTom20 的相互作用17 3.1 引言17 3.2 实验材料、试剂及仪器17 3.2.1实验材料、试剂17 3.2.2 实验仪器17 3.3 实验方法17 3.3.1rBTI 螺旋区多肽的合成17 3.3.2 多肽与rTom20相互作用检测——紫外分光光度法 18 3.3.3 多肽与rTom20相互作用检测——等温滴定量热法 19 3.4 实验结果19 3.4.1rBTI 螺旋区疏水性质分析19 3.4.2 紫外分光光度计检测多肽与rTom20相互作用并计算结合常数20 3.4.3 等温滴定量热法检测多肽与rTom20相互作用并计算结合常数22 3.5 讨论26 第四章 rBTI及其突变体对Hep G2 细胞增殖的影响27 4.1 引言27 4.2 实验材料、试剂及仪器27 4.2.1实验材料、试剂27 4.2.2 实验仪器27 4.3 实验方法27 4.3.1 构建rBTI 的突变体27 4.3.2 全面表达纯化rBTI及其突变体28 4.3.3MTT 检测多肽、rBTI 及其突变体对Hep G2 细胞活性的影响29 4.4 实验结果29 4.4.1 成功构建rBTI及其突变体并表达纯化29 4.4.2MTT 检测多肽、rBTI 及其突变体蛋白对Hep G2 的细胞活性31 4.5 讨论33 小结与展望34 参考文献36 攻读学位期间取得的研究成果42 致 谢43 个人简介及联系方式44 承 诺 书45 学位论文使用授权声明46 Contents ChineseAbstractI AbstractIII Chapter 1LiteratureReview1 1.1Mitochondrial function1 1.1.1Mitochondrialdysfunction1 1.1.2Diseasesrelatedtomitochondrialdysfunction1 1.2.3Research on MitochondrialTargetingMolecules2 1.2Mitochondrialproteintransport 2 1.2.1Mi