植物愈伤组织诱导培养实验指导--李老师.docxVIP

植物组织培养基的配制与植物愈伤组织诱导 一、 实验目的； 通过植物组织培养基和植物愈伤组织诱导实验的学习和训练，使学生了 解植物组织培养的基本原理和操作技术，初步掌握 MS固体培养基制备 方法、外植体的常规灭菌技术以及愈伤组织诱导方法。 二、实验原理： 根据植物细胞全能性原理，培养植物材料。即在无菌条件下，将植 物的器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）放在人工培养基上进行培 养，通过细胞分裂，形成一团薄壁细胞，即愈伤组织。愈伤组织可以在 适宜的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下进行再分化，重新 产生出植物的各种器官和组织，进而发育成完整的植株。 三、实验内容实验包括以下 三、实验内容 实验包括以下3部分内容: 实验1-1、植物组织培养基母液的配制和保存 实验1-2、MS培养基的配制与灭菌 实验1-3、胡萝卜愈伤组织的诱导 实验1-1植物组织培养基母液的配制和保存 1、目的要求 学习植物组织培养基母液的配制方法，为培养基的配制 做准备。 2、基本原理 植物培养基是植物离体培养的组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离 体培养材料提供近似活体生存的营养环境，主要包括水、大量元素、微 量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节等物质。 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确， 常常将培养基成分首先配 制成比实际培养基浓度大若干倍的母液，然后在配制培养基时，再根据 所需浓度，按比例稀释。本实验以 MS培养基为例，学习培养基母液的 配制。 MS培养基母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐 母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长激素母液，在不同 类型的培养基中使用。 3、实验仪器设备和试剂 3.1仪器、用具 分析天平、酸度计（或 pH试纸）、冰箱、药匙、玻棒、称量纸、滴管、 洗瓶、记号笔、烧杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、500ml、 1000ml）、磨口试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量 筒、移液抢、微波炉等。 3.2试剂 （1） 95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 （2） MS培养基成分： 大量元素（母液 I ） : NHNO、KNO CaCb2H2O MgSO7mO KHPO; 微量元素（母液口 ） : KI、HBQ MnSQ4H2O ZnSQ.7H2O NQM0Q.2H2O CuSQ5H2O C0CI2.6H2Q； ③铁盐（母液川）:FeSQ.7H2Q NQ.EDTA.2H2Q； ④有机成分（母液,维生素和氨基酸）：肌醇、盐酸吡哆醇（维生素）、 烟酸（Vpp）、盐酸硫胺素（维生素Bi）、甘氨酸； （3）植物生长调节物质：2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D） o 4、操作步骤 （1） MS大量元素母液的配制 按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大 10倍，按照表1中的次序 分别准确称量后，分别用 50ml烧杯，加入蒸馏水 30 ml溶解（可以加 热至60C?70C,促其溶解）。溶解后，按顺序倒入一大烧杯中（烧杯 中事先加入约50ml的蒸馏水，目的避免由于盐浓度过高使钙离子与磷 酸根离子、硫酸根离子形成不溶于水的沉淀），注意最后加入氯化钙溶 液，混匀，用250mL容量瓶定容。将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好 标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于 4C冰箱中保存备 用。 表1 MS培养基大量元素母液（10倍）的配制剂量 母液 化合物名 称 培养基 用量 （mg/L ） 扩大 倍数 称取量 （mg） 母液体积 （mL） 1L培养 基吸取母 液量 （mL）  大量 KN0 3 1,900 10 4,750 250 100 NH4NO3 1,650 4,125 MgSO 4 7 H2O 370 9,25 丿兀素 KH2PO4 70 425 CaCI 2 2H 2O 440 1,100 微量兀素母液的配制 按照培养基配方的用量，将微量元素各种化合物(除去铁盐)扩大 100 倍(表2)，用万分之一天平分别准确称取，可以混合溶解，最后定容。 将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好标签，注明母液名称、配制日期、 配制人姓名，置于4 C冰箱中保存备用。 表2 MS培养基微量元素母液(100倍)的配制剂量 母液 化合物名称 培养基用量 (mg/L ) 扩大倍 数 称取量 (mg) 母液体 积(mL) 1L培养基吸 取母液量 (mL) 微 MnSO 4 4H2O 22.3 223 量 ZnSO4 7H2O 8.6 100 86 100 10 元 H3BO3 6.2 62  素 KI 0.83 8.3 Na2MoO 4 2H2 O 0.25 2.5 CuSO 4 5H2O 0.025 10ml* C0CI2 6H2O 0.025