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中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告
姓名:常天易 系年级:海洋生命学院 2012 级 专业:生物科学
科目:分子细胞生物学实验 学号: 12050011006
PEG 介导的动物细胞融合技术
一、实验目的
(1)、通过实验,对体细胞融合有一个清醒的认识
(2)、通过PEG介导鸡血细胞融合,初步掌握利用PEG介
导动物细胞融合的实验技术。
二、实验原理
真核细胞通过介导和培养, 两个或多个细胞合并成一个双核或多
核的细胞的过程称为细胞融合, 通过此技术可以实现不同种类的细胞
的融合。基因型相同的细胞融合称为同核体(homokaryo
n),基因型不同的细胞融合称为异核体(heterokaryo
n)
目前,诱导细胞融合的技术主要有三种:病毒,聚乙二醇(PE
G),电激。第一种方法是通过生物病毒的方式,诱导细胞与细胞之
间的融合。后两种方法通过化学物理的手段使得细胞膜的膜脂类分子
的排列发生变化,去掉作用因素后,质膜分子的排列恢复原有的形态,
在恢复的过程中,可以诱导相接触的细胞发生融合。
PEG介导的细胞融合,其融合效果受到以下几个因素的影响
①、PEG的分子量与浓度
PEG的分子量及其浓度越大, 细胞融合效果越明显, 但对细胞
的毒性也越大。 本实验使用的PEG分子量为4000D, 浓度为5
0%
②、PEG的ph值
经验证,PEG的浓度在8 . 0~8. 2时,融合效果最好
③、PEG处理时间
处理实验越长, 融合效果越好,但对细胞的毒性也越大。故一般
将处理时间限制在1分钟以内。 本实验不涉及后续的细胞培养, 所以
处理时间可适当放宽至数分钟
④、融合时的温度
温度越高, 细胞膜脂质的流动性越好, 故在细胞可以承受的范围
内,适当的提高温度有利于细胞的融合
三、实验材料
新鲜鸡血
0. 85%生理盐水
GKN液
50%PEG液
四、实验步骤
取出鸡血悬液 1ml,加入 0.85%生理盐水, 4ml ,混匀。
1200r/min 离心 5 分钟,移除上清液
加入 4ml 0.85%生理盐水,重悬细胞, 1200r/min,离心 5min ,
移除上清
加入 4ml 0.85%生理盐水,重悬细胞, 1200r/min,离心 10min,
移除上清
向离心沉淀中加入 2mlGKN ,使之成为 10%的细胞悬液
取血球悬液 1ml,加入 0.5ml 50%的 PEG 液,混匀,开始计时
从计时开始,到盖上盖玻片在显微镜下观察为止。将处
理 1、2 、3、4 分钟的细胞样品,显微镜下观察计数视野内融
合细胞的核数和视野内细胞的总核数,从而计算融合率
计数视野内融合细胞的核数和视野内细胞的总核数,从而计算融
合率
视野内融合细胞的核数
融合率 100%
视野内细胞核的总数
五、实验结果
本实验分为四个实验组, 经 PEG 处理的时间分别为: 1,2,3,4 分
钟,各个实验组中视野内融合的细胞的核数,视野内细胞核的总数,
融合率如下:
视野内融合的细胞的 视野内细胞核的
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