R2A琼脂培养基适用性检查的方案.doc

R2A 琼脂培养基适用性检查方案 文件编号： VP-QC-2015-05 起草人： 审核人： 批准人： 批准日期： 年 月 日 目录 1 概述 1 2 验证目的及范围 1 3 验证小组人员组成及职责 1 4 验证依据 2 5 验证前准备 2 6 验证的实施 2 7 偏差处理 5 8 验证数据及评估 5 9 验证报告及评审 5 10 再验证及周期 5 11 验证文件及归档 5 12附件5 验证目的及范围 2015 版《中华人民共和国药典》 中规定纯化水的微生物限度检查采用的培养基为 R2A 琼脂培养基。为了保证纯化水微生物限度检查的准确性和可靠性， 培养基进行适用性检查实验。 验证方法 照 2015 版药典非无菌产品产品微生物限度检查：微生物计数法（通则 1105） 中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试 验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌，应符合规定。 3.验证小组人员组成及职责： 验证小组由以下部门人员组成：质量部、 QC、生产部。 验证小组组成及职责列表 组成 职 责 1. 负责起草验证方案的起草 2. 负责本方案的培训 3. 仪器仪表校验确认 QC 4. 负责验证的实施 5. 负责数据的收集和整理 6. 负责数据分析 7. 负责完成验证报告 质量部 1. 负责验证方案、验证报告的审核与批准 2. 负责验证现场的监督审查 生产部 1. 负责保障设备、器具的完好 2. 负责动力系统的保障 验证接受标准 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 ~2 范围内， 且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致； 被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 验证前准备 验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次 验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。 将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒， 以确保其对试验的 结果没有影响。 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。 相关文件 序号 相关文件 文件编号 1 DHG 型电热恒温鼓风干燥箱操作规程 WI-100 2 BSC-100-II-B2 生物安全柜操作和维护保养规程 WI-101 3 WXQI-S-18SI 自动手提式灭菌器使用和维护保养规程 WI-103 4 DK 型电热恒温水浴锅操作规程 WI-104 5 HWS 型恒温恒湿箱操作规程 WI-105 6 JA2003N 电子天平操作及维护保养规程 WI-106 7 PHS-3C 型 PH 计操作及维护保养规程 WI-108 8 SHP-3C 型低温生化培养箱操作及维护保养规程 WI-109 9 YJ-875SDB 型净化操作台的操作及维护保养规程 WI-113 10 《培养基管理规程》 WI-76 验证的实施 实验材料 培养基 类别 培养基名称 厂家 批号 验证培养基 A2R 琼脂培养基 对照培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 仪器设备 DHG 型电热恒温鼓风干燥箱、 BSC-100-II-B2 生物安全柜、 WXQI-S-18SI 自动手提式灭菌器、 DK 型电热恒温水浴锅、 HWS 型恒温恒湿箱（ 30～ 35℃）、 JA2003N 电子天平、 PHS-3C 型 PH 计、 SHP-3C 型低温生化培养箱（ 20～25℃）、 YJ-875SDB 型净 化操作台。 稀释剂： PH 无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液 计数用培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 验证用菌株 铜绿假单胞菌 [CMCC(B)10 104] 枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63 501] 灭菌前调节 PH 溶液： 10%碳酸钠溶液或 1mol/L 氢氧化钠溶液 /15%冰醋酸溶液或 1mol/L 盐酸溶液。 验证内容 培养基的配制灭菌过程 将分装包装好的培养基分别放入灭菌器中 121℃灭菌 15 分钟后取出。取 1 管已灭菌的培养基，放冷至 25℃测定 pH 值，应在范围内。 外观性状 灭菌后的培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、浑浊、橡胶塞被培 养基沾染等，均应挑出弃去。将制备好的培养基保存在 2～25℃、避光的环境中，在存 放 2 周后，培养基外观应色泽正常，澄清透明。 菌液制备 接种铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中 或胰酪大豆 胨琼脂培养基上， 3035℃ 培养 1824 小时。 菌液计数（每种菌液接种 2 个） 分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌（ 50～100cfu/ml）各 1ml 加入无菌培养 皿，立即注入不超过 45℃胰酪大豆胨琼脂培养基 15~20ml，混匀，凝固，置 30~35℃ 培养箱培养 48 小时，计数每株试验菌平行制备 2 个平皿。 培养基适用性检查 分别取上述制备的