《基因工程瓶》第二章工具酶.ppt

《基因工程》第二章工具酶;一、DNA限制性内切酶;Lurva和Human（1952）以及Bertani和Weigle（1953）发现了噬菌体λ的限制作用;各种细菌都能合成一种或几种顺序专一的核酸内切酶。这些酶切割DNA的双链，因为它们的功能就是切割DNA，限制外源性DNA存在于自身细胞内，所以称这种核酸内切酶为限制酶。;（一）命名原则;（二）分类和特性;第二类限制性内切酶的识别顺序是一个回文顺序, 如EcoRI的识别顺序为：;讨论:下面的序列中可能含有多少个潜在的酶切位点?;;;;;;;一、DNA限制性内切酶;二、甲基化酶;在原核生物中，DNA 甲基化酶作为限制修饰系统的一个组成部分广泛存在，它们的作用是保护宿主菌不被相应的限制性内切酶切割。大多数实验室使用的大肠杆菌包括三种位点特异性的 DNA 甲基化酶。;如果限制性内切酶的识别位点是从表达 Dam或 Dcm 甲基化酶的菌株中分离而得，并且其甲基化识别位点与内切酶识别位点有重叠，那么该限制性内切酶的部分或全部酶切位点有可能不被切割。;(1) 真核生物ＤＮＡ甲基化;一、DNA限制性内切酶;（一）DNA聚合酶;（一）DNA聚合酶;1．大肠杆菌DNA聚合酶（E.Coli DNA polymerase）主要有3种作用：;2．噬菌体DNA聚合酶;催化转录的RNA聚合酶是一种由多个蛋白亚基组成的复合酶。;真核生物的RNA聚合酶;（三）反转录酶;（四）核酸外切酶;（八）连接酶;（十）碱性磷酸酶;本章结束!;