高效液相色谱仪应用精析.ppt

现代分析仪器应用技术 高效液相色谱仪 主讲:李春萍 西北农林科技大学生命科学学院 cccp2006@126c0m 029 内容 ●色谱法基本知识 ●高效液相色谱相关内容 ●影响分离的因素 ●实验前准备工作 ●主要分析步骤  色谱分析法 起源 基本概念 分类  起源:1906年俄国植物学家米哈伊尔茨维特 色谱分离法又称层析法,层 离法等,是一种现代的物理化 石湘 学分离、分析方法,广泛应用 于化学、医药、生化、环保等 领域,它既可用于混合物的分 分离 离和样品纯度的检查,又可用 植物 色素 于对化合物的定性和定量分析。  基本概念 基线:色谱柱中只有流动相通过时,检测器响应信号的记录值。它反映 检测器本底的高低 噪声:由未知的偶然因素引起的基线起伏现象。 峰宽:通过色谱峰两侧的拐点切线,在基线上所截的距离。 保留时间:从进样点到色谱峰的顶峰的时间。 死时间:流动相通过色谱系统的时间。在HPLC中为溶剂峰前沿出现的 时间 死体积:进样器到检测器出口未被固定相所占有的空间。 色谱峰:流出曲线上的突起部分。 分配系数(K):分配平衡后,组分在固症相与流动相中的浓度之比。 K与组分、固定相、流动相及温度有关。 容量因子(k):也叫分配容量、容量比及质量分配系数等,是达到分 配平衡后,组分在固定相的量与流动相中的量之比  基本概念 基线漂移:是基线的一种向上或向下的缓慢移动,可在较长时间 (0.5-10h)内观测到。可掩蔽噪声利小峰,它与整个液相色谱系 统有关。 线性范围:当注入最小至最大进样量时,检测器响应处于与进样量 成正比的范围 检测器的池体积:它应小于最早流出的死时间色谱峰的洗脱体积的 1/10,否则会产生严重的柱外谱带扩展。 灵敏度:也叫响应值,指一定量的物质通过检测器时所给出的信号 大小。灵敏度越高,检测限越小。它是没有考虑噪声,其高低变化 并不能严格表示检测器的检测能力 检测限:又称为敏感度,指在噪声背景上恰能产生可辨别的信号时 (一般信噪比≥2),在单位体积或单位时间内需向检测嚣送入的样 品量。它考虑了噪声,是全面衡量检测器性能的重要指标。检测限 越小,仪器性能越好。  色谱法分类 按分离的机理可分为 吸附色谱:是利用吸附剂表面对不同组分吸附性能的 差别而使混合物得以分离。 分配色谱:是利用不同组分在固定相与流动相间的分 配系数(或溶解度)不同而使混合物得以分离。 离子交换色谱:是利用不同组分对离子交换剂亲和力 不同而使混合物得以分离。 凝胶色谱(排阻色谱):是利用凝胶对不同组分因分子 大小不同而阻滞作用不同使混合物得以分离。 亲和色谱、毛细管电泳和毛细管电色谱。  色谱法分类 按操作形式可分为 薄层色谱:吸附、分配、离子交换、凝胶薄层。 纸色谱:分配色谱 ●柱色谱:吸附、分配、离孑交换、凝胶柱色谱。 按流动相状态的不同,可分为: 气相色谱法(GC 超临界流体 液相色谱法(LC 超临界流体色谱(sF 临界点 纯物质的相图  、高效液相色谱相关内容 特点 ●研究对象 高效液相色谱仪展示 高效液相色谱仪工作流程 高效液相色谱仪结构 ●高效液相色谱法分类  1HPLC特点 高效液相色谱法是20世纪60年代后期发展起来的一 种新颖、快速的分离分析技术。 高压:压力可达(152-3.04)×104kPa。 高速:所需的分析时间一般少于1h。 典色谱法 高效:一根柱子可以分离100种以上的组分 高灵敏度:用微升数量级的试样可进行分析。 流动相选择范围广:大部分的有机溶剂以及水 和有机溶剂的混合物均可用。