高效液相色谱仪组成及日常维护.ppt

●●●●● ●●●● ●●● 第一部分 高效液相色谱仪及简单操作维护|88。 ●●●● ●●●● ●●● ●●●● ●●  ●●●●● HPLC技术的发展过程 ●●●● ●●● ●HPLc是经典液相色谱的发展,同时是气相 色谱理论的扩展和延伸。 二十世纪60年代末期生产出商品化液相色 谱仪,其发展非常快速,经过30多年的努 力已成为分离学科中的骨干技术。 目前,HPLC技术已趋于成熟 特点:采用高压泵、高效填料、高灵敏度 检测实现了快速、高效和操作自动化  HPLc和经典液相色谱法的比较 ●●●●● ●●● 高效液相色谱法 经典液相色谱法 色谱柱柱长cm 10~200 色谱柱柱内径mm 2~10(不锈钢管) 10~50(玻璃管) 固定相粒度(粒径μm) 17~5,10 75~600 流动相流动方式 高压输液泵压入 靠重力流入 溶液的传质、扩散速度 快 缓慢 色谱柱入口压力/MPa 2~40 0.001~0.1 色谱柱柱效/(理论塔板 2*103~10*104 数/m) 进样量/(g) 106~10-2 1~10 分析时间h 0.05~1.0 l~20  ●●●●● ●●●● 高效液相色谱法的特点 ●●● (1)分离效能高:柱效可达5K~10W米 (2)选择性高:通过流动相的控制来改善分离过程的 选择性 (3)检测灵敏度高: UV-最小检出量可以达到109g FD-最小检出量可以达到1012g (4)分析速度快采用了高压泵  ●●●●● ●●●● ●●● 控制系 数据 以进样阀 柱子 收集 白/手动进样 图1液相色谱仪系纨  ●●●●● 流动相和储液罐 ●●●● ●●● (1)储液罐 ∞材质:玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料聚醚 醚酮(PEEK) 棕色玻璃瓶会避免藻类的生长 容积:05~20L ∞放置位置:高于泵体,保持一定的输液静压差 ∞注意:密封、过滤  ●●●●● ●●●● (2)流动相-使用限制 ●●● 避免使用下述可腐蚀钢铁的溶剂: 碱金属卤化物及其酸溶液,如:碘化锂、氯化 钾等 ∞高浓度无机酸,如硝酸、硫酸. 可能含有过氧化物的色谱纯醚如THF、二氧六 环、二丙基乙醚) 在使用前必须用干燥氧化铝过滤除去过氧化物 含强络合剂的溶液,如EDTA,乙二胺四乙酸 ∞四氯化碳与2-异丙醇或四氢呋喃的混合液  ●●●●● ●●●● (2)流动相-过滤 ●●● 流动相过滤的目的 ○过滤去除可能存在的微小固体颗粒 保护色谱高压泵和色谱柱 流动相过滤方法 在线溶剂过滤 抽真空过滤  ●●●●● ●●●● 流动相在线过滤: ●●● 清洁方法: 、用水冲洗残留溶剂后,将过滤器 放在约35%浓硝酸里浸一小时 2、用二次蒸馏水彻底冲洗过滤器 3、将过滤器重新装好。 不能用超)4、定期清洗溶剂过滤器及溶剂瓶 声波清洗 (每1~3个月至少清洗一次)  ●●●●● ●●●● 流动相抽真空过滤 ●●● 过滤用膜:水系和有机, 孔径:0.22um和0.45um