农业部1193号公告-1-2009-转基因植物及其产品成分检测耐贮藏番茄D2及其衍生品种定性PCR方法.pdfVIP

ICS 65．020．01 B04 中华人民共和国国家标准 农业部1193号公告一1—2009 转基因植物及其产品成分检测 耐贮藏番茄D2及其衍生品种 定性PCR方法 andderived Detectionof modified geneticallyplants products for PCRmethod tomatoD2anditsderivates Quafitative ripen-delay 2009—04—23发布 2009—04—23实施 中华人民共和国农业部发布 农业部1193号公告一1—2009 刖 罱 本标准由中华人民共和国农业部科技教育司提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部科技发展中心、上海交通大学。 本标准主要起草人：杨立桃、沈平、张大兵、宋贵文、李想。 农业部1193号公告一1—2009 转基因植物及其产品成分检测 耐贮藏番茄D2及其衍生品种定性PCR方法 1范围 本标准规定了转基因耐贮藏番茄D2转化体特异性定性PCR检测方法。 本标准适用于转基因耐贮藏番茄D2及其衍生品种，以及制品中D2的定性PCR检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单Og包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适合于本标准。 NY／T 672转基因植物及其产品检测通用要求 NY／T 673转基因植物及其产品检测抽样 NY／T674转基因植物及其产品检测DNA提取和纯化 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3 1 LAl52基因LAT52 gene 编码富含半胱氨酸蛋白的基因，在番茄花粉中特异性表达。 32 of1)2 D2转化体特异性序列event-specificsequence 外源插入片段3L端与番茄基因组的连接区序列，包括外源插入载体3’端NOS终止子序列和番茄 基因组的部分序列。 4原理 根据转基因耐贮藏番茄D2转化体特异性序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。依据是否 扩增获得预期228bp的特异性DNA片段，判断样品中是否含有D2转化体成分。 5试剂和材料 使用分析纯试剂和重蒸馏水。 51琼脂糖。 52 10 g／L溴化乙锭溶液：称取1．0g溴化乙锭(EB)，溶于100mL水中。 注：演化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液。 53 10mol／L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠(NaOH)80．0 g，先用t50mL水溶解后，再加水定容到200 mL。 54 500 rmnoI／L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8．o)：称取18．6 g乙二铵四乙酸二钠(EDTA—Na2)，加 入70mL水中，再加入适量氢氧化钠溶液(5．3)，加热至完全溶解后，冷却