2020第3章植物组织培养操作流程.ppt

10 、镊出烟草苗 a 11 、镊出烟草苗 b 12 、放入培养皿中 13 、 烟 草 幼 苗 形 态 —— 生 长 点 14 、剪取茎段 15 、剪好的烟草苗 培养皿的拿法 16 、烟草茎段接种 a 17 、 烟草茎段接种 b 18 、接种好的烟草苗 a 19 、接种好的烟草苗 b 20 、重新封好瓶口 a 21 、重新封好瓶口 b 22 、重新封好瓶口 c 23 、重新封好瓶口 d 24 、写好班级和组号 二 烟草愈伤组织的培养 １、挑选生长健康的无菌烟草叶或茎， 在灭菌的培养皿中→剪成 0.5-1cm 2 的小块或相当大小的茎段 ( 造成伤 口), →接种在盛有 MS 培养基的培养 皿中→将培养皿用封口膜封住。 ２、在光照培养箱中，25℃下 ,16 小 时光照，培养两周，可形成愈伤组 织。 1 、将烟草苗剪出伤口 2 、剪好的烟草叶片和茎段 3 、打开培养皿 4 、烟草愈伤组织接种 a 5 、烟草愈伤组织接种 b 第三讲 植物组织培养操作流程 一 实验目的 植物细胞和组织培养的技术性强，要 求无菌操作，通过本实验可使同学初 步掌握常规的组织培养技术，加深对 无菌操作的了解。 二 实验原理 1. 植物的全能性： 植物体的任何一个 细胞都具有生长分化成为一个完整植 株的能力，称为植物的全能性。植物 组织培养就是利用植物的全能性进行 离体无菌植物培养的一门技术。 2 、植物组织培养的发展 ? 1904 年，德国植物胚胎学家 Haning 用 萝卜和辣根的胚进行培养，首次获得 组培的成功。 ? 1922 年，豌豆、玉米和棉花的茎尖培 育获得成功 ? 1933 年，我国李继侗等进行银杏离体 胚培养获得成功。 3 、植物组织培养的应用 ? 在作物育种上的应用（单倍体植株、种 间杂交、细胞融合、细胞突变、种质保 存和基因工程）。 ? 在作物脱毒和快速繁殖上的应用。 ? 在遗传、生理生化和病理研究上的应用。 4 、植物组织培养的内容 植物组织培养包括以植物和它的离 体器官、组织、细胞和原生质体为外植 体的离体无菌培养，拥有几种不同水平 的培养技术，即整体的、器官的、组织 的、细胞和原生质的培养技术。（ 植株 培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、 细胞培养、原生质体培养 ） 石 斛 植 物 的 芽 培 养 长 春 花 的 胚 性 细 胞 培 养 黄 芪 的 发 状 根 固 体 培 养 黄 芪 发 状 根 的 液 体 培 养 5 、植物组织培养中的重要概念 ? 愈伤组织： 指由植物的一种组织或器官 经历脱分化形成的原始胚样组织，它具 有再分化成为完整植物体的潜能； ? 外植体： 植物组织培养中用来进行无菌 培养的离体材料，可以是器官、组织、 细胞和原生质体等； ? 无菌和消毒： 烟草愈伤组织 诱导一周的烟草愈伤组织 长 春 花 的 胚 性 细 胞 培 养 三 实验材料 ? 烟草（ Nicotiana ）属茄科植物，是重要的 工业原料，是组织培养中研究的最为广泛 的植物材料。 ? 豌豆（ Pisum sativum ）属豆科植物，是粮 食、饲料和重要的蔬菜作物，豌豆的根、 茎、子叶、下胚轴、上胚轴、花芽等外植 体，皆可形成愈伤组织，其中茎尖、幼胚、 幼叶等器官可成功的再生成植株 。 四 实验要求 1 、实验开始前，值日生将地板拖洗一遍， 所有同学将自己的实验台擦洗一遍，同组 两位同学请先认真研究好实验步骤，明确 合作和分工，以加快实验速度，减少染菌 机会，实验开始后，请尽量不要走动，有 事请举手。 2 、无菌操作要注意：每次操作前， 将双手用酒精棉球擦拭消毒；解剖 针、解剖刀等金属工具用火焰烧过 灭菌，在酒精中冷却，再将酒精烧 去方可使用；尽量减少无菌三角瓶 和培养皿在空气中的暴露时间；所 有无菌操作尽量快速完成，并请在 酒精灯附近进行。 3 、请先用带菌豌豆练习茎尖解剖， 经检查无误，操作熟练后，再进行 无菌解剖及接种，以减少植物材料 染菌或失水死亡的机率。 五 实验内容 １ . 烟草无菌苗的快速切繁 — 继代 培养 ２ . 烟草的愈伤组织培养 ３ . 豌豆苗的茎尖培养 组 培 实 验 用 品 一、烟草无菌苗的快速切繁 1 、点着酒精灯，双手擦拭消毒，打开长有无菌烟 草苗的三角瓶，三