食品过敏原的检测及解析总结计划.docx

食品过敏原的检测与分析 双击自动滚屏 时间： 2010-4-26 来源：热带医学杂志 作者： 浏览： 159 次 【字体： 大 中 小】 食品过敏现已成为一个新兴的公众性健康问题， 特别是在发达国家， 调查显示全世界范围内有１％～２％的成年人对食品过敏， 而低于三岁的儿童中 有８％以上对食品过敏。产生的临床症状包括皮肤反应（荨麻疹、血管性水肿、 湿疹），呼吸症状（哮喘、鼻炎），肠胃症状（呕吐、腹泻、肠胃痉挛），系统 反应（心血管症状包括过敏性休克）等。在过去的几十年中，食品过敏的发病率 和流行情况日益增加， 给临床变态反应学和食品工业造成了巨大的压力。 加上现 在人们生活习惯的改变， 饮食面的快速拓宽，特别是转基因食品的大量涌现， 过 敏症状亦趋于多样化、 复杂化和严重化。 因此，对食品过敏原 的检测与分析就是 一个极其重要的问题。 一般来说，食品过敏原 为分子量介于 10000～70000 之间的蛋白或糖 蛋白，占食品总蛋白的极小一部分， 分别属于不同的蛋白家族。 但是微量的食品 过敏原蛋白即可引起严重的过敏反应。 系统全面、精确可靠的食品 过敏原 检测和 分析技术体系正在形成，本文对这一研究领域的研究进展进行了详细的综述性 分 析。 １ . 利用人血清特异性 lg Ｅ检测食品 过敏原 过敏原与 lg Ｅ结合是 过敏原 体现其生物活性的中心环节， 因此食品 过敏原检测过程中特异性 lg Ｅ的血清学检测必不可少。对于能够引起５０％病 人产生过敏反应的主要食品 过敏原必须测定特异性 lg Ｅ与食品 过敏原 结合的能 力，包括引发过敏反应的频率， 热稳定性和水解稳定性等。 但是这种方法不能解 决食品过敏原的交叉致敏问题，因为它是用单个过敏病人的血清进行检测的。 １．１ RAST抑制实验和 EAST抑制实验 自从 lg Ｅ成功纯化及抗 lg Ｅ抗体的制备后，放射 过敏原吸附实验 （ radio allergosorbent test RAST）得以设计应用。之后改进的酶标记过敏原吸附实验（ enzyme linked allergosorbent assays,EAST）及荧光和化学发光标记的检测技术也均已建立。这些方法均是检测特异性 lg Ｅ与过敏 原相互作用的免疫 分析方法。特异性 lg Ｅ抗体与食品过敏原 的结合在固相载体 表面进行并被检测，是体外食品过敏诊断的一种已标准化的方法， 得到广泛使用。 在此基础上进一步建立了放射 过敏原吸附抑制实验 （ radio allergosorbent test RAST 抑制实验） 和酶标记 过敏原吸附 抑制实验技术 （ enzyme linked allergosorbent assays,EAST 抑制实 验）。在体外过敏原检测实验中， 这些方法是目前国际上变态反应临床及科研人 员使用最广泛、 最灵敏的方法， 也是评价 过敏原总致敏活性的关键技术。 其优点 是全自动荧光酶联免疫技术， 避免人工实验操作带来的误差， 保证了它的灵敏性 和准确性，同时解决了不同食品 过敏原的交叉致敏问题。 因此在国际上不同实验室之间，ＲＡＳＴ 抑制实验技术和统计 分析方法按统一的程序进行， 每年还有定期的全球质量控制检测以保证仪器正常运行和结果可靠。 目前， 在国外大医院、主要过敏原 生产企业基本都使用法玛西亚公司 ＵｎｉＣＡＰ系统进行Ｒ ＡＳＴ抑制实验。 此外， ＲＡＳＴ抑制实验还是 过敏原 生产厂商比较每一批 过 敏原制剂和内部参考品差异的主要方法。 ＲＡＳＴ和 ＥＡＳＴ 抑制实验已经被用来检测和 分析一系列食 品的致敏性，如生海鲜和比萨饼中的鳕鱼 过敏原；含有花生的食品和花生油等相 关产品的致敏性； 大豆相关食品的致敏性； 榛实过敏原 的热稳定性和水解稳定 性研究；坚果类食品的交叉致敏作用等。 ＲＡＳＴ 和 ＥＡＳＴ抑制实验的一个主要不足是对人血清的依 赖性，血清是很难保证一致的， 因此这两种方法也难以标准化。 尽管它们可以很 好的检测食品 过敏原，但是人 lg Ｅ抗体特异性的不确定性大大限制了这些方法在更宽领域的应用。此外，商业化的食品 过敏原固相载体与 lg Ｅ 的结合能力也不尽相同。所有这些都限制了ＲＡＳＴ和ＥＡＳＴ抑制实验在食品 过敏原 定量检测中的应用。 总体上来说，ＲＡＳＴ和ＥＡＳＴ抑制实验是检测各种形式的食 品过敏原蛋白（ 蛋白粗提物， 纯化的过敏原样品， 不同物种、食品中 过敏 原）与 lg Ｅ结合能力的较为理想的方法。 １．２ ＩＥＦ－ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 免疫印迹 实验 通过等电聚焦（ＩＥＦ） 和ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 电泳（ 双向 电泳也包括在内） 结合免疫印迹分析 可以进行单个食品 过敏原 的分离。ＳＤＳ － ＰＡＧＥ 免疫印迹 目前可以用于几乎所有的食品 过敏原