工艺综合实训指导书.docx

PAGE PAGE # 工艺综合实训指导书 第一篇：菌种相关技能 技能一 显微技术实验操作 一、显微技术的应用： 1.鉴定菌种形态，初步鉴定菌种种类； 在微生物生产、 科研工作中对操作的可靠性进行检测， 如是否染菌。 二、实验目的： 掌握实验室显微镜的使用方法，能够根据实验需要运用各种染色方法进行鉴定。 三、学习重点： 观测样品的制备 光学显微镜的使用 常用染液的制备 单染色法和革兰氏染色 四、使用仪器 超净工作台、载玻片（若干） ，去离子水，移液枪，灭菌枪头，接种环 五、试剂 结晶紫、酒精、草酸铵、蒸馏水（或去离子水） 、碘、碘化钾、番红 六、染色液配制 结晶紫染色液： 溶液A结晶紫2.5g、酒精（95%） 25.0ml 溶液B草酸铵1.0g、蒸馏水100.0ml 将结晶紫研细后，加入 95%乙醇使之溶解，配成 A 液；将草酸铵溶于蒸馏水配成 B 液，两 液混合后即成。 卢哥氏碘液： 碘1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水 300.0g。 先将碘化钾溶解在一小部分的蒸馏水中， 再将碘溶解在碘化钾溶液中， 然后加入其余的蒸馏 水即成。 番红染液： 番红2.0g、蒸馏水100.0ml。 七、染色步骤： （ 1 ）革兰氏染色法： 涂片——干燥——固定（不能在火焰上烤）——染色（结晶紫 1min） ——水洗——镜检 如果省去固定步骤，菌体的芽孢、荚膜一般都能看到 （ 2）细菌的单染色法 涂片——干燥——固定 初染（结晶紫1滴，约1min）――水洗 媒染（滴加碘液，覆盖 1min）――水洗 脱色（用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止）一一水洗 复染（用番红液染 1-2min） ――水洗 镜检（干燥后，置油镜观察） 阴性呈红色，阳性呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌， 常常 呈假阳性。 技能二PH 技能二 PH 计的使用 一、实验目的 : 掌握 PH 计的标定方法 （一点标定法、两点标定法 ） 并学会不同 PH 标准缓冲液溶液的配制。 二、实验原理 : PH 计是利用 PH 复合电极对被测溶液中不同的 PH 值产生的直流电位 ,通过 PH 前置放大器 和测温传感器对被测溶液的温度测量信号叠加 ,并进行自动运算后输入到转换器 ,以达到 PH 值的数字显示。 PH 计经过标准缓冲液校准后，即可测量溶液的 PH 值。 三、仪器 PHS-3B 精密级数字式酸度计 100ml 小烧杯三只 玻璃棒 洗瓶 250ml 容量瓶三只 温度计一只 四、试剂 邻苯二甲酸氢钾、混合磷酸盐、四硼酸钠、去离子水 标准 PH 缓冲液的配制 1、PH 4.0 邻苯二甲酸盐缓冲液 取邻苯二甲酸氢钾一小袋，溶解后用 250ml 容量瓶定溶到 250ml 即可 2、PH 6.86 混合磷酸盐 取混合磷酸盐一小袋，溶解定容到 250ml 即可 3、PH 9.18 四硼酸钠 取四硼酸钠一小袋，溶解定容到 250ml 即可 五、实验步骤 仪器的预热 〈1〉接通电源，把开关置于“开”的位置，预热 10 分钟。 〈2〉温度补偿方法 自动温度补偿法 将仪器后侧的“选择开关”置于自动，把仪器的“ PH-T-mV ”置于“ T”， 数字显示即为测温传感器测得的温度，同时仪器将温度信号送入 PH-T 混合电路进行运算， 从而起到 PH 自动补偿的目的。 手动温度补偿法 拔去温度传感器，将仪器后侧的“选择开关”置于手动。把仪器的 “PH-T-mV ”置于“ T”，调节温度调节旋钮，使数字显示值与温度计显示数值相同，仪器 将该温度信号送入 PH-T 混合电路进行运算，从而起到 PH 自动补偿的目的。 仪器的标定 1一点标定法：以手动温度补偿为例 用去离子水清洗电极并用滤纸吸干，然后插入标准缓冲液中（ PH=4.00或PH=9.18），将 “PH-T-mV ”旋钮置于“ T”，调节温度旋钮使显示温度和标准液温度相同。将“ PH-T-mV ” 旋钮置于“ PH”， “斜率”旋钮顺时针旋足，调节“定位器”旋钮，使显示器数值和标准缓 冲液在该温度下 PH 值（ PH=4.00 或 PH=9.18） 注：仪器一点标定结束后，此时“定位”旋钮不再变动。 〈2〉两点标定法：以手动温度补偿为例 用去离子水清洗电极并用滤纸吸干，然后插入 PH=6.86标准缓冲液中，将“ PH-T-mV ”旋 钮置于“ T”，调节温度旋钮使显示温度和标准液温度相同。 将“ PH-T-mV ”旋钮置于“PH ”, 数字显示值为 PH=7.0 的标准缓冲溶液标准值。 a）如果测量的缓冲溶液为酸性，将电极从 PH=6.86缓冲溶液中取出，用去离子水清洗，再用 滤纸吸干，然后插入 PH=4.00 标准缓冲液中，调节“斜率”旋钮，使数字显示值为该温度 下PH=4.00缓冲液标准值。 b）如果测量的