人教版选修1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件19张.ppt

课题二 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 研究思路 筛选菌株 ? 统计菌落数目 ? 设置对照 ? ㈠ . 筛选菌株 1 、实例： PCR 技术 DNA 多聚酶链式反应 是 一种在体外将少量 DNA 大量复制 (PCR) 的技术 ，此项技术要求使用 耐 0 高温（ 93 C ）的 DNA 聚 合酶。 原因： 因为热泉温度 70 ～ 80 0 C ，淘汰了绝大 多数微生物只有 Taq 细菌被筛选出来。 方式：寻找 目的菌种 时要根据它对 生存环境 的 要求，到相应的环境中去寻找。 2 、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于 目的菌株 生长的条件 ( 包括营 养、温度、 pH 等 ) ，同时抑制或阻止其他微生 物生长。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特 点， 包括营养、生理、生长条件等； 方法： ⑴抑制大多数微生物的生长 ⑵促进 目的菌株 的生长 结果： 培养一定时间后，该菌数量上升，再通过 平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。 3 、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基： KH 2 PO 4 1.4g NaH 2 PO 4 2.1g MgSO 4` 7H 2 O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 从物理性质看此培养基属于哪类？碳源 、氮源分别是什么？ 固体培养基 葡萄糖 尿素 4 、培养基选择分解尿素的微生物的 原理 培养基的 氮源为尿素 ，只有能合成 脲酶 的微生 物才能分解尿素，其他微生物由于不能分解尿 素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑 制，所以用此培养基就 能够选择出分解尿素的 微生物 。 允许 特定种类 的微生物生长，同时 抑制或阻止 其他种类 微生物生长的培养基，叫做 选择培养基 ㈡ . 统计菌落数目： 1 、显微镜直接计数： 利用 血细胞计数板 ，在显微镜下计算一定容积 里样品中微生物的数量。 缺点（了解） 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 2. 稀释涂布平板法计数 ⑴原理： 在 稀释度 足够高时，微生物在固 体培养基上所形成的 一个菌落 是由 一个单 细胞 繁殖而成的，即 一个菌落代表原先的 一个单细胞。 （ 2 ）计算 每克样品中的菌落数＝ (C ÷ V) × M 其中， C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌 落数， V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积 (ml) ， M 代表稀释倍数。 阅读课本 22 页中间的资 料并思考问题作出回答 说明设置重复组的重要性。 在设计实验时，一定 要涂布至少 3 个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力 与准确性 。在分析实验结果时， 一定要考虑所设置的重复 组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要 重新实验 。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30 — — 300 的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将 同一稀释度加到三 个或三个以上的平板中 ，经涂布，培养计算出 菌落平均数。 ③ 统计的菌落往往比活菌的实际数目低（两个 或多个细胞连在一起时，平板上观察的只是一 个菌落）。 （三）设置对照 主要目的是排除实验组中非测试因素对实验 结果的影响，提高实验结果的可信度。 判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用： 完全培养基（营养成分齐全）接种后培养 观察菌落数目。 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 6 目的实验时， A 同学从对应的 10 倍稀释的培养基 中筛选出大约 150 个菌落，但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约 50 个菌落。分析其原因 。 原因： ⑴土样不同 ⑵培养基污染或操作失误 ( 或者是混入了其他的含 氮物质 ) [ 一 ] 土壤取样 “微生物的天然培养基” 数量最大、种类最多 大约 70% — 90% 是细菌 从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先 铲去表层土 3 cm 左右，再取样，将样品装入事先 准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 （二） 样品的稀释 ? 应在火焰旁称取土壤 10g 。 ? 在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ? 分离不同的微生物采用不同的稀释度 细菌数量，选用 10 4 、 10 5 和 10 6 的稀释液； 放线菌数量，选用 10 3 、 10 4 和 10 5 的稀释液； 真菌数量，选用 10 2 、 10 3 和 10 4 的稀释液 考点！！！ 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在 30 ～ 300 之间、适于计 数的平板