人基质金属蛋白酶9(MMP9)酶联免疫分析.docx

PAGE # PAGE # nitroPOF professional download Che fcw bW orfitw it nttropdfjxiir/i- 一 nit ro nit roPOF professional dwnloBd Che trSii oHhw it nflnwdr.Dar.-. PAGE # 如有帮助，欢迎支持 人基质金属蛋白酶-9 (MMP-9 )酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 45 用/L -1200 旧/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶 -9 ( MMP-9 )含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人基质金属蛋白酶 -9 ( MMP-9 )水平。用纯化的 人基质金属蛋白酶-9 ( MMP-9 )抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次 加入基质金属蛋白酶-9 (MMP-9 )，再与HRP标记的基质金属蛋白酶 -9 ( MMP-9 )抗体结合, 形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催 化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白 酶-9 ( MMP-9 )呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线 计算样品中人基质金属蛋白酶 -9 (MMP-9 )浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml X1 瓶 7 终止液 6ml X1 瓶 2 酶标试剂 6ml X1 瓶 8 标准品(2400旧/L ) 0.5ml X1 瓶 3 酶标包被板 12孔$条 9 标准品稀释液 1.5ml X1 瓶 4 样品稀释液 6ml X1 瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml X1 瓶 11 圭寸板膜 2张 6 显色剂B液 6ml X1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 ?标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于 -20 C保存，但应避免反复冻融 .不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 1200 用/L 5号标准品 150 d的原倍标准品加入 150』标准品稀释液 600 ⑷/L 4号标准品 150 d的5号标准品加入 150 d标准品稀释液 300 ⑷/L 3号标准品 150 d的4号标准品加入 150 d标准品稀释液 150 ⑷/L 2号标准品 150 d的3号标准品加入 150 d标准品稀释液 75 ⑷/L 1号标准品 150 d的2号标准品加入 150 d标准品稀释液 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 created with created with 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50 M，待测样品孔中先加样品稀释液 40 M, 然后再加待测样品10 M （样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 温育：用封板膜封板后置 37C温育30分钟。 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 加酶：每孔加入酶标试剂 50 U，空白孔除外。 温育：操作同3。 洗涤：操作同5。 显色：每孔先加入显色剂 A50 4，再加入显色剂 B50也轻轻震荡混匀，37C避光显色 15分钟. 10?终止：每孔加终止液 50 4，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 准备试剂，样品和标准品 加入准备好的样品和标准品，37E反应30分钟 洗板5次，加入酶标试剂，37匸反应30分钟 L 洗板5次，加入显色液X 379显色10分钟 J L 加入终止液| 15分钟之内读0D值 计算 计算 以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标 created wtth nit ro nit roPOF professional dwnloBd (he fcw b* it n tlrqarifjb PAGE # 准曲线的直线回归方程式，将样品的 0D值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 1