酶标仪的检测原理.pdf

酶标仪的检测原理 光是电磁波，波长 100nm～400nm 称为紫外光， 400nm ～780nm 之间的光可被人眼观 察到，大子 780nm 称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体 反射回来。 绿色植物之所以是绿色， 是因为植物吸收了光中的红色光谱。 酶标仪测定的原理 是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 检测单位： 光通过被检测物， 前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量， 特定波长下， 同一种被 检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 检测单位用 OD 值表示， OD 是 optical delnsity （光密度）的缩写，表示被检测物吸收 掉的光密度， OD ＝1og （1 ／trans），其中 trans 为检测物的透光值。 根据 Bouger-amberT-beer 法则， OD 值与光强度成下述关系： E＝OD=log Ι0/ 其中Ι E 表示被吸收的光密度， Ι0为在检测物之前的光强度， Ι为从被检测 物出来的光强度。 OD 值由下述公式计算： E＝OD=C× D×E C 为检测物的浓度 D 为检测物的厚度 E 为摩尔因子 在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长， 在此波长下， 此物质能够吸收最多的 光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我 们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收， 为了消除这种非特异性吸收， 我 们再选取一个参照波长， 以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。 检测 波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 Anthos 酶标仪检测值计算 仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为 4095 。 仪器定义没有光源下的透光值为 0 ％，没有检测物的透光值为 100 ％。则实际检测中，检测 物的透光值均在 0 ％一 100 ％之间。透光值 的计算如下： T ＝（ Meas— Min ）／（ Max— Min ） 其中 T 为透光值， Meas 为检测的二进位数值， Min 为在 0％的情况下检测的二进位 数值， Max 为在 100 ％的情况下检测的二进位数值，举例如下： MaX=3600 Mn=20 Meas ＝30 T= （30-20 ）/3600-20) ＝0．0028 OD ＝1og （1/T ）=1og （1/0.0028）=2.552 Anthos 酶标仪的中心定位 仪器会自动对酶标孔进行中心定位， 中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均 带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时，仪器其实要进行 35 个点的测量，选取 最中间的 5 个点的均值为本孔的 OD 值。 光源的参照通道 参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。 酶标仪的用途和其它提示 用于 ELISA 试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。 质量控制 质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制。 空白校正 有一些试剂盒的说阴书将空白孔设置为空气， 其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置 的，请按照试剂盒的说明书要求进行。 检测结果的解释 由于有相当多的因素会影响检测的结果， 如不同的酶标板， 检测试剂的体积， 都会造成 OD 值的不，因此，只有使用同一酶标板反应的试剂检测结果才能比较和分析