试验五一培养基的制备与灭菌.ppt

（一）培养基的制备与灭菌 实验五、土壤中微生物的分离纯化 与活菌计数 一、培养基的制备 目的要求 ? 明确培养基的配制原理 ? 通过对基础培养基的配制，掌握配制培 养基的一般方法和步骤 ? 按培养基的用途分 基础培养基 鉴别培养基 选择培养基 ? 按培养基的物理状态分 固体培养基 半固体培养基 液体培养基 基本原理 ? 按成分不同分 天然培养基 合成培养基 半合成培养基 培养基的配方 牛肉膏蛋白 胨琼脂培养 基（一种天 然培养基， 用于分离和 培养细菌） 配方： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 20g 水 1000ml pH 7-7.2 灭菌 121 ℃ 20min 高氏 Ⅰ 号培养 基（一种合成 培养基，可用 于培养放线菌） 配方： 可溶性淀粉 20g KNO 3 1g NaCl 0.5g K 2 HPO 4 0.5g MgSO 4 0.5g FeSO 4 0.01g 琼脂 20g 水 1000ml pH 7.2 ～ 7.4 灭菌 121 ℃ 20min 马丁氏培养基 （一种合成培 养基，可用于 分离培养真菌） 配方： 蛋白胨 ５ g 葡萄糖 10g K 2 HPO 4 １ g MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g 琼脂 20g １ % 孟加拉红水溶液 3.3ml 水 1000ml pH 自然 灭菌 121 ℃ 30min 使用前，添加链霉素 固体淀粉培养 基（一种鉴别 培养基，用于 大分子物质水 解的生理生化 鉴定） 配方： 蛋白胨 10g NaCl 5g 牛肉膏 5g 可溶性淀粉 2g 蒸馏水 1000ml 琼脂 20g 灭菌 121 ℃ 20min 葡萄糖蛋白胨 水培养基（一 种鉴别培养基， 用于肠道菌的 生理生化鉴定） 配方： 蛋白胨 5g 葡萄糖 5g K 2 HPO 4 2g 蒸馏水 1000ml pH 7.0 ～ 7.2 灭菌 112 ℃ 30min 器材 ? 溶液或试剂 4mol/L NaOH ， 1mol/L HCl ，各类培养基的配方药品。 ? 仪器或其他用具 试管，三角瓶，搪瓷杯，量筒，天平，药匙，电磁炉， 高压蒸气灭菌锅， pH 试纸 (pH5.5 ～ 9.0) ，硅胶塞，棉 花，报纸，记号笔等。 操作步骤（一） 1 ． 计算 ： 根据配方按照用量计算。 2. 称量： 3 ． 溶解： 如有琼脂，要不断搅拌 避免糊底 。 4 、 调节 pH ： 用 1mol/L NaOH 或 1mol/L HCl 调节， 以 pH 试纸或 pH 计测定。 5 ． 过滤： 趁热用四层纱布过滤。（ 本次实验省略 ） 操作步骤（二） 6. 分装 试管：固体不超过试管高度的 1/5 ；液体、半固体不超过试 管高度的 1/4 或 1/3 。 三角烧瓶：总体积的 一半 为限。 管口或瓶口不得沾有培养基 操作步骤（三） 7. 加塞 1. 正确； 2. 管内部分太短，外部太松； 3. 外部过小 操作步骤（三） 8. 包扎： 注明培养基的名称。 9. 灭菌 ： 按不同培养基所需的温度、时间灭菌。 10. 搁置斜面 ( 1/3 ～ l/2 ，不能超过 1/2 ) 。 11. 无菌检查 实验无菌器皿的准备 无菌水：在试管或三角瓶内量取实验所需的自来水， 经 121℃ 20min灭菌。 无菌 移液吸管 、 培养皿 ：报纸包扎后，经121℃ 20min灭菌 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加 压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 目的要求 二、消毒与灭菌 灭菌是指杀死一切微生物的营养体，芽 孢和孢子。消毒则指消灭病原菌和有害微生 物的营养体，因而只是部分灭菌。 消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、 过滤、照射和使用化学药品等方法。 基本原理 干热灭菌 ? 火焰灼烧法 ? 干热灭菌法（烘箱内热空气灭菌法） 湿热灭菌法 ? 加压蒸汽灭菌法 紫外线灭菌法 微孔滤膜过滤除菌 火焰灼烧法 直接在火焰上灼烧灭菌 主要用于实验室接种针 ( 环 ) 、试管口、三角瓶口 和金属小工具等的灭菌。 干热灭菌法 设备：电热烘箱 适用于 耐高温器皿 ， 160- 170℃，维持 2 小时 注意事项： 1. 温度不可超过180℃，以防玻璃器皿上的棉塞及包装纸 烤焦着火。 2. 灭菌时物品不宜堆放得太紧，以免妨碍空气流通。 3. 灭菌物品不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦 起火。 4. 电烘箱内温度