PTLC和柱色谱解析.ppt

浅谈 （ 硅胶 ） 制备型薄层色谱与 （ 硅胶 ） 柱色谱的操作问题 —— 结合我们实验室中具体操作 一般我们实验中应用最多的是以 硅胶 吸附剂 为固定相的薄层色谱和柱色谱。 虽然很多化学实验书中都叙述了（硅 胶）制备型薄层色谱与（硅胶）柱色谱的 操作技术的实验方法，但大多数都是比较雷 同地泛泛地描述，而且有些描述在实验室中 并不适用。例如，很多书中都提到装柱时先 在底层铺一层石英砂，加入固定相后再在顶 部铺一层石英砂。比较繁琐，而且效果 “？”，在实验室中不适用。 吸附色谱的原理： 吸附色谱是根据物质在硅胶上的吸附 力不同而得到分离，一般情况下极性较大 的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不 易被硅胶吸附， 整个过程即是 吸附、 解吸、 再吸附、 再解吸 过程。 第一部分（硅胶）制备型薄层色谱 (PTLC) 一、制板操作 二、点样操作 三、回收分离组分 四、常见问题及注意事项 第二部分（硅胶）柱色谱的操作问题 一、装柱 二、上样 三、洗脱剂的使用 四、洗脱的技巧 第一部分（硅胶）制备型薄层色谱 (PTLC) 一、 制板操作： 我们实验室常用的制板操作（手工制备硅胶硬板）： 1. 溶解制备 0.5%CMC-Na 溶液 ( 为何用 0.5%CMC-Na 溶液？ ) 先说一下 CMC-Na （ 1 ） . 结构 : （ 2 ）物理和化学性质： 纤维素羧甲基醚的钠盐，为白色或乳白色纤维状粉末 或颗粒，几乎无味， 具吸湿性 。 易于分散在水中成透明胶状溶液，在 乙醇 等有机溶剂 中不溶。 1% 水溶液 pH 为 6.5 ～ 8.5 ，当 pH>10 或 <5 时，胶 浆粘度显著降低，在 pH=7 时性能最佳 。 对热稳定，在 20 ℃以下粘度迅速上升， 45 ℃时变化较 慢， 80 ℃以上 长时间 加热可使其胶体变性而粘度和性能明 显下降。 在碱性溶液中很稳定 ，遇酸则易水解， pH 值为 2-3 时 会出现沉淀，遇多价金属盐也会反应出现沉淀。 作用是做粘合剂。其他粘合剂： 煅石膏、淀粉 等。 0.5%CMC-Na 溶液制备过程： 例如，取蒸馏水 1000ml ，加热 煮沸 ? ， 将 羧甲基纤维素钠 5g 分次撒入沸水中，玻 璃棒搅拌，直到完全溶解。 煮沸前加少量 水补 蒸发量 。 为何分次加入 CMC-Na ？ 2. 硅胶粘合 取一定量硅胶放入研钵中，加入 3 倍量 的 0.5%CMC-Na 溶液，向 同一方向 研磨至 无气泡， 粘液成线状 即可。 为什么要同一方向？ 3. 铺板 适宜的薄层吸附剂的厚度为 0.5-2mm ， 板的尺寸一般为 20cm × 20cm 大约需要硅胶 的量为 30 克（经验值），所以 PTLC 常用来 分离毫克级的样品。 二、点样操作 上样是 PTLC 分离的一个最关键的步骤。薄层板最好 先用 甲醇 展开一次，以减少杂质的混入。 上样前将样品用挥发性的溶剂溶解，浓度应在 5%- 10% 左右，点样带应尽量窄，以获得较好的分离效果。 一般来讲，一块 1mm 厚的 20cm × 20cm 的硅胶薄层 板可分离 10-100mg 的样品， 如果厚度加倍，可多上样 50% 。 三、回收分离组分 PTLC 展开结束后，有紫外吸收的化合物，可以在紫 外灯下确认色带位置； 无紫外吸收的化合物，可采用在板上面覆盖一块玻璃 板，然后在板的边缘喷洒显色剂来确认色带的位置 。 确定各组分色带的位置后，用刮刀将该色带从板上刮 下，然后用 极性尽量低 （ 极性越高，往往被提出的杂质的 量就越大 ）、 对该化合物溶解度好的溶剂