敲除grail基因能提升cd8~+t细胞的抗肿瘤活性.docxVIP

敲除 Grail 基因能提升 CD8~+ T细胞的抗肿瘤活性 T 细胞耐受是肿瘤免疫成功与否的关键性因素之一 , 因此破除 T 细胞的免疫 耐受是抗肿瘤成功关键与否的一个决定性因素。本文主要研究了一种 E3 泛素连 接酶 --GRAIL(Gene related to anergy in lymphocytes 淋巴细胞的基因相关无 反应性 ) 的表达。 敲除 Grail 可显著上调浸润到转移性淋巴瘤组织周围的 CD8~+T细胞功能 , 以及长期控制肿瘤体积。 更重要的是 , 治疗性的转输 Grail 敲除的 CD8~+T细胞可 以显著的抑制肿瘤的建立。 同时 , 敲除 Grail 后可以提升机体抗肿瘤的免疫反应和 CD8~+T细胞的功能。 另外 ,Grail 缺乏的 CD8~+T细胞还表现为能上调 IL-21R(IL-21 接收器 ) 的表达以 及对 IL-21 信号通路的过度反应 , 即 Grail 促使 IL-21R 的泛素化和降解。 此外 , 与正常人相比 , 从淋巴瘤患者体内分离出的 CD8~+T细胞表达高水平的 Grail 和低水平的 IL-21R 。综上 , 本文旨在指出 Grail 是控制 CD8~+T细胞功能的 重要因素以及 Grail 是影响 CTLs(cytotoxic T lymphocytes 细胞毒性 T 淋巴细 胞 ) 功能的一个重要因素。 适应性免疫系统 , 尤其是细胞毒性 CD8~+T淋巴细胞 , 在控制肿瘤性占位上的 重要性已经被广泛接受 [1] 。 CD8~+T淋巴细胞的效应器可以通过细胞凋亡配体 , 诸如肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL) 或穿孔素 / 颗粒酶以及干扰素 - γ的 机制有效的摧毁靶细胞 [2] 。 同时 CD4~+T细胞同样在抗肿瘤免疫中起重要作用 ,CD4~+T细胞的能通过提 供细胞因子来维持肿瘤特异性 CTLs的功能 [3,4] 。肿瘤免疫治疗的主要目标是通 过激活患者自身的免疫系统对抗肿瘤。 但是 , 肿瘤微环境能产生诸多抑制性因子 , 这些因子能增强机体的 T 细胞耐 , 这是成功实现肿瘤免疫治疗的主要障碍 [5] 。因此 , 正确理解肿瘤 T 细胞耐受的细胞和分子的机制可以为研究的肿瘤的治疗方法指明方向。 最近数据表明 E3泛素连接酶 , 包括 Cbl-b,Itch, 以及 Grail, 是调节 T 细胞耐 受方面的关键因素 [6] 。Cbl-b 和 Itch 已经被证明和肿瘤的进展相关 [7-10] 。 Grail 是一种位于内涵体小室上的 , 是能诱导 T 细胞无能的 I 型跨膜蛋白 。最近数据表明 Grail 敲除型的小鼠在体内及体外实验中均有抗免疫耐受功能 [12,13] 。 Grail 的表达需要新近被激活的 CD4~+T细胞的 TCR信号通路的正常下调才能实现。敲除 Grail 能使免疫细胞发生过度增殖以及超量产生细胞因子 [12] 。 此外 ,Grail 的缺乏还能破除调节性 T 细胞 (Treg cells) 对免疫系统的抑制。但是 ,Grail 对于 CD8~+T细胞的影响仍是未知的。 在本研究中 , 我们发现在淋巴瘤小鼠模型的淋巴浸润细胞中 ,Grail 有显著的高表达。本文还研究了 Grail 在移植性 EL-4 和 EG-7淋巴瘤模型中的表达情况 , 我们发现沉默 Grail 基因显著提高了小鼠对肿瘤的自发性保护作用 , 这种保护作 用主要由 Grail 基因缺失的小鼠的 CD8~+T细胞所介导。 在原发性肿瘤模型试验中 , 敲除 Grail 能提升宿主自身 CD8~+T细胞的抗肿瘤 作用。而且 , 在小鼠的 CD8~+T细胞中 ,Grail 能控制 IL-21R 的表达 , 在幼稚的 Grail-/-CD8~+T 细胞的体内实验中 , 我们发现 ,Grail-/-CD8~+T 细胞含有更多的 IL-21R, 由于 IL-21R 的水平增加 , 从而使 CD8~+T细胞对细胞因子 IL-21 的反应性 提高 , 由此得出 Grail 能促使 IL-21R 的泛素化和降解。 更重要的是 , 与老鼠模型取得的结果相相似 , 我们发现相较于正常供体 , 淋巴 瘤患者的 CD8~+T细胞中 Grail 的表达上调 , 以及 IL-21R 表达的下调。总而言之 , 本实验结果表明 Grail 在 CD8~+T细胞中总体表现为抑制机体免疫系统 , 敲除 Grail 可对抗免疫耐受并且增加 CD8~+T细胞的抗肿瘤活性。