dna提取各种缓冲液的配制.docx

植物总DNA得提取 一、所需仪器设备及消耗品 剪刀、塑料袋（封口）、冰箱、棕色广口瓶（1000、5 0 0. 200 . 1 0 0 . 50m 1 ）、量 简（1000. 500、100. 10ml）x 烧杯（1000、50 0 . 200、100ml）. p H试纸、电子天 平、高压火菌锅、研钵、液氮罐（液氮）、水浴锅、离心机、移液器（1套）、枪头（link 2 OOmk 2 0 pl）.枪头盒、离心管（1、5ml）（包括盒与架）、一次性手套、电泳仪、电泳 槽、塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制）、记号笔、单而刀片 二、所需化学药品及试剂 CTAB、NaCk ED T A-N a 2 ? 2H2O. Tris、冰乙酸、硼酸.卩一兢基乙醇、NaAc. 氯仿（三氯甲烷）、异戊醇、无水乙醇、浪酚蓝、琼脂糖、蔗糖、淚化乙锭（EB）、RNase、 NaOH、HC1（浓）、ddH2O 三、各种缓冲液得配制 3 5 mix 3 = 1 05ml 10m 1 x3=30ml 4mlx3=12m 1（一）2%C TAB提取缓冲液（300ml）（高压灭菌） 3 5 mix 3 = 1 05ml 10m 1 x3=30ml 4mlx3=12m 1 4 mol/L 得 N aCl 1 mol/L 得 Tris_HCl 0、5mo 1 /L得 EDTA CTAB 2 gx3=6 g （二）lxTE （母液 p 118、0） （ 5 0ml）（高压灭菌） 1 mol/L 得 Tris?HCl （pH8、0） 500pl 0、5 m ol/ LW EDTA（ p H 8、0） 100 pl 最后加ddll2 O定容到 5 0ml 工作液为0、lxTE（4 5 ml 菌得ddH?O中，加入5m 1已灭菌得lxTE） （三） 4 mol/L得 NaCl（15 0m 1 ）（高压灭菌） 35.055g得NaC 1 ,加d dH20120ml溶解，再加水定容到1 5 0m 1 （四） lmol/L得NaCl （40 0 pl）（用于配制RNase储存液） 取 4mol/L 得N a C I （已灭菌）lOOpil,加 300jil 灭菌得 ddH2Oo （五） 3m o I/L 得 Na Ac 溶液（pH5、2） （50 m I ）（高压灭菌） 20。430ml5 20。4 30ml 5、2 50ml（lm 1 ） 0 5g 加 ddH2 O 用冰乙酸调\i pH至 加d d H2O定容到 （A）RNase 储存液（1 0m g /ml） 10p I1 5 pllOmg1 mol/L 得 Tris—HC1 （ pH7、 10p I 1 5 pl lOmg 1 mol/L 得 NaCl RN a s e 沸水浴1 5~2 0 m i n （七）EB储存液（lmg/ml） EB3 0m g EB ddH2O 30ml 磁力搅拌至完全溶解，装入棕色瓶，铝箔包裹,保存于室温。 制胶时EB终浓度为0、5pg/ml （30ml加15」40m 1加20卩1） （八） 10x T BE缓冲液（电泳缓冲液）（高压灭菌） T ris 碱 5 4 g 硼酸 2 7、5 g 0、5mol/L得 EDT A（pH8、0） 2 0 ml 以上溶于400m 1得ddH2O中，在左容到500ml 工作液为lxTBE或（）.5 xTBE （九） 6x上样缓冲液（4°C保存） 0、25%得浪酚蓝（2、5mg/lml40% （w/v）得蔗糖水溶液） 4 0%（w/v）蔗糖水溶液（2 g/5m 1得ddlhO,加热溶解，注:温度不能太高） （十）lmol/L得HC1溶液（不用灭菌） 8、62 ml得浓盐酸，加灭菌dd H20 9 1、38ml,混匀，室温保存（100ml）° （十一）5mo 1 /L得NaOH溶液（50ml,10g得N a OH溶于50ml灭菌得ddH2O中）（不用灭 菌） 2 00 g得NaOH,溶于灭菌得d d HQ中,立容至100 0 ml （十二）lmo 1 /L 得Tr i s—HCl（pH氏 0） （1 0 0m 1 ）（高压灭菌） 1 2o 1 1 g 得Tris 碱 8 0m I 得 ddH2 O 加浓盐酸调节pH值至8、0 （大约加4、2ml） （十三）0. 5 mo I /L 得 EDTA（pH8、0） （50 m 1 ）（高压灭菌） 9? 3O5g 得 E DTA—Na2?2b）2O lg得N：）II 磁力搅拌器剧烈搅拌 4 0ml 得 ddbhO - 最后加水定容到50ml,用NaOH调节pH值至8、0 DNA立量用紫外分光光度讣法,1 OD26°~50pg/m 1双链DNA。 PCR （聚合酶链反应） 一、所需仪器设备及消耗品 冰