生物监测课件 项目四 水体污染的毒性试验 藻类活动抑制试验.pptxVIP

生 物 监 测 项目四 水体污染的毒性试验 任务三 藻类生长抑制试验 延迟符 目 录 CATALOG 试验藻种的选择 试验程序 质量保证与质量控制 数据与报告 延迟符 延迟符 藻类毒性生长抑制 延迟符 试验藻种的选择种 PART 01 延迟符 Selenastrum capricormutum Scenedesmus obliquus Chtorella Vulgaris Chlorella pyrenoidosa 延迟符 受试生物种 常用的种类 延迟符 试验程序 PART 02 延迟符 培养基的配制 配制培养基时可将营养盐类按所需浓度直接加入无菌的蒸馏水或去离子水中。应按顺序逐一加入，待一种盐类完全溶解后再加另一种。 储备培养 预培养 设定平行和对照 自贮备培养物中取出一定量的藻液，接种到新鲜的无菌培养基中，接种藻细胞浓度大约为104个/mL。在试验要求和相同条件下培养。应使藻类在2～3d内达到对数生长，然后再次转接到新鲜培养基中。如此反复转接培养2～3次，经检查藻类生长健壮并正处于对数生长期时即可用来制备试验中需要的藻试验液。 藻种可在试管内固体培养基斜面上保存。在培养基中加入1.5%～2%的琼脂，灭菌后倒入试管，冷却成斜面，然后接种藻类，棉塞封闭，在较低的光照和温度条件下可保存较长时间。 正式试验中每个测试浓度至少要设置三个平行样，每一系列设两个对照样。 当使用助溶剂增加受试物的溶解度时，对照组中助溶剂应与测试液中助溶剂浓度最高时一致。 试验程序 试验准备 延迟符 预实验 注 意 为确定正式试验中受试物的浓度范围，可以先进行一次预试验。预试验的浓度可按对数间距排布，最低浓度应为受试物的检测下限，最高浓度应为饱和浓度。无需设平行样。 如果预试验中在最高浓度测点，藻的生长抑制低于50%，或者在最低浓度测点中藻的生长抑制高于50%，可不必再进行正式试验。 试验程序 试验操作 预试验 先配储备液，然后用此贮备液稀释配制成一系列不同浓度的受试物试验液；试验浓度可按等对数间距设计。 预培养后，镜检七细胞浓度，用培养基稀释至藻细胞浓度为2×104个/mL，即成为可用于试验接种的藻试验液。 是正式用于测试的，含有藻试验液和受试物试验液的液体。先在每个三角瓶中加入50mL藻试验液，然后再添加50mL受试物试验液；对照组瓶中只加50mL培养基 试验开始后，每隔24h，即在24、48、72h时，从每个瓶子取样进行生长测定。测定项目包括藻类细胞浓度、光密度或叶绿素 延迟符 试验程序 试验操作 易溶于水的化学物质的正式试验 用溶剂制备受试物的贮备液，其浓度应是测试时所需最高浓度的104倍。溶剂在试验溶液中的含量最高不得超过100mg/L。要设置助溶剂对照 用培养基将经过预培养的藻培养物配制藻试验液，使细胞浓度为104个/mL。 每个三角瓶中加入100mL藻种液，再添加10µL溶剂。其他步骤同易水溶性化学品。 延迟符 试验程序 试验操作 有限水溶性化学物质的正式试验 延迟符 废水或环境水源的正式试验 水样必须密封、低温存放（0～4℃）。样品瓶中应充满水样不留空气。 测试废水样品或环境水样之前要预先振摇。可直接用水样作为毒物试验液，如果水样毒性过大，也可使用稀释水配成适当浓度的试验液，对于含有难溶性毒物的水样，同样可以使用助溶剂或乳化剂。 试验程序 试验操作 废水或环境水样的正式试验 废水的稀释液浓度可用体积百分比表示 延迟符 藻类 生长测定 方法 细胞 计数 光 密度 叶 绿素 用0.1mL计数框或血球数板对藻细胞的数量计数；每一样品至少计数两次，如计数结果相差大于15%，应予重新计数。 取一定量的测试液在分光光度计上测定其光密度，波长可选用650、663nm或其他波长，亦可用荧光光度计测定。 样品经离心或过滤后，用丙酮、乙醇或其他溶剂萃取，进行分光测定，亦可用荧光光度计测定。 试验程序 试验操作 藻类生长测定方法 延迟符 质量保证与质量控制 PART 03 延迟符 本方法适用于水溶性且在试验条件下能保留在水中的物质。如需助溶剂，该助溶剂在水中的浓度不得超过100mg/L，使用乳化剂或分散剂时，其浓度应不影响光透性。 试验开始的3d内，对照组藻细胞浓度至少应增加16倍 浓度设置应做到，在某一浓度下试验组与对照组相比，生长率没有显著下降，而且另一浓度时，96h的生长抑制应高于50%。 在试验时最好使用推荐的藻种，以利于提高试验结果的可比性和可重复性。若选其他种类应在实验报告中写明方法和说明理由。 1 2 3 4 延迟符 质量保证与质量控制 质量保证与质量控制 延迟符 数据与报告 PART 04 延迟符 延迟符 数据与报告 数据与报告 ① 浓度的换算 把显微镜视野计数结果换算为细胞浓度N： A=πr2 N --每瓶试样