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;基因工程的基本操作程序;一、目的基因的获取;（一）从基因文库中获取目的基因;基因组文库与部分基因文库的关系;;;;;;;;① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术。 ; 过程：; 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。;人工合成;从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成; 用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。;;2.基因表达载体的目的 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并可以遗传给下一代； （2）使目的基因能够表达和发挥作用。 ;3.基因表达载体的组成：;（二）方法;（1）农杆菌转化法;③转化过程:; 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。;（3）花粉通道法;2.将目的基因导入动物细胞;（2）操作程序:;常用法：Ca2+处理;四、目的基因的检测与鉴定;1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因;基因探针：是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列。 　 基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。 ;DNA分子杂交示意图 ;（二）鉴定（个体生物学水平）;怎样检验抗虫基因在棉细胞内是否表达呢？;类型;归纳: 基因工程的基本操作程序;①检测是否插入目的基因，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的DNA杂交，看是否有杂交带。 ②检测是否转录出了mRNA，利用分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的mRNA杂交，看是否有杂交带。 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白质进行抗原－抗体杂交，看是否有杂交带。 ④还可以进行个体水平的鉴定，根据其性状。 提示：①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再???同位素标记的DNA探针杂交； ②抗原－抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。; 利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？;基因组文库与部分基因文库的关系;;;2.将目的基因导入动物细胞;基因探针：是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列。 　 基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。 ;DNA分子杂交示意图