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精品文档 《基因工程原理与技术》标准答案及评分标准 一、 名词解释（本大题共 5 小题，每题 2 分，总计 10 分） 限制性内切酶的 Star 活性： 限制性内切酶的识别和酶切活性一般在一定的温度、离子 强度、 pH 等条件下才表现最佳切割能力和位点的专一性。如果改变反应条件就会影响 酶的专一性和切割效率，称为星号（ * ）活性。 受体细胞 ：又称为宿主细胞或寄主细胞等，从试验技术上讲是能摄取外源 DNA并使其 稳定维持的细胞；从试验目的讲是有应用价值和理论研究价值的细胞 T-DNA：是农杆菌侵染植物细胞时，从 Ti 质粒上切割下来转移到植物细胞的一段 DNA。 该DNA片段上的基因与肿瘤的形成有关。 克隆基因的表达： 指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过 程。典型的基因表达是基因经过转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质的过程。 α - 互补： β - 半乳糖苷酶（β -gal) 是大肠杆菌 lacZ 基因的产物，当培养基中的一种色 素元（ X-gal ）被β -gal 切割后，即产生兰色。 大肠杆菌的β一半乳糖苷酶由 1021 个氨 基酸构成， 只有在四聚体状态下才有活性。 大肠杆菌 lacZ 基因由于α区域缺失， 只能编 码一种在氨基端截短的多肽，形成无活性的不完全酶，称为α受体；如果载体的 lacZ 基因在相反方向缺失， 产生在羧基端截短的多肽， 这种部分β - 半乳乳糖苷酶也无活性。 但是这种蛋白质可作为α供体。受体一旦接受了供体（在体内或体外），即可恢复β - 半乳糖苷酶的活性，这种现象称为α互补． 由载体产生的α供体能够与寄主细胞产生 的无活性的α受体互作形成一种八聚体，从而恢复β - 半乳糖苷酶的活性。如果培养基 中含有 X-gal 的诱导物 IPTG时，凡是包含有β - 半乳糖苷酶活性的细胞将转变为蓝色， 反 之不含有这种酶活性的细胞将保持白色。 二、填空题（本大题共 7 小题，每空 1 分，总计 20 分） 1、 质粒按自我转移的能力可分为＿接合型＿质粒和＿非接合型＿质粒；按复制类型 可分为＿＿松弛性＿质粒和＿严紧型＿质粒。 2、 为了防止 DNA的自身环化，可用 __碱性磷酸酶 _除去双链 DNA 5'___ 端的磷酸基团 ___。 3、 人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为 __0 C __ 时吸附 DNA，在温度为 __42 C ___ 时摄人 DNA。 4、 仅克隆基因 (DNA 片段 ) 用途而言，最简单的质粒载体也必需包括三个组成部分： __复制区：含有复制起点 __、_选择标记：主要是抗性基因 ____、__克隆位点：便 于外源 DNA的插入 _。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 5、 Southern blotting 杂交能够检测外源基因是否整合进受体细胞基因组；外源基 因的转录表达需要通过＿ northern 杂交或 RT-PCR＿来揭示；而外源基因＿＿翻 译＿水平的表达则需通过免疫学检测或 Western 杂交才能揭示，其使用的探针是 ＿蛋白质＿＿＿。 6、 外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位有＿＿细胞质＿、 ＿周质＿、 ＿＿细胞外＿＿。 7、 Vir 区基因的激活信号有三类，它们是＿酚类化合物＿、＿中性糖和酸性糖＿、＿ pH 值＿。 。 1 欢迎下载 三、  简答题（本大题共  7 小题，总计  50 分） 1. 请你指出下面几种序列中最有可能是限制性 Ⅱ 类酶的识别序列，并说明为什么 ? GAATCG， AAATTT， GATATC， ACGGCA （ 6 分） 答案： GATATC（ 2 分）；AAATTT（2 分），因为它们是回文序列（ 2 分）。 影响质粒转化率的因素？（ 6 分） 答案：质粒的大小，拷贝数（ 1 分）；受体细胞的状态（ 2 分）；转化的外在条件， 如温度等（ 2 分）质粒与宿主菌的比例（ 1 分）。 什么是 cDNA文库 ? 构建 cDNA文库涉及哪些基本过程 ? 它同基因组文库有什么不同 ? （ 10 分） 答案：cDNA文库是指某生物某一发育时期所转录的 mRNA经反转录形成的 cDNA片段与某 载体连接而形成的克隆的集合。（ 2分） 构建过程： mRNA的提取（ 1 分）；cDNA第一链的反转录合成，第二的形成； （ 1 分）； cDNA与适当载体的连接（ 1 分）；重组子转化到受体细胞中（ 1 分）。 cDNA文库与基因组文库的区别 cDNA文库是有时效性的。（  1分） 材料来源： cDNA文库只反映 mRNA的分子结构。基因组文库构建时遗传信息供体是基 因组 DNA,无发育时期及组织器官特异性， 在一个完全的基因组文库中包含着基因组 DNA上的所有编码区及非