微生物限度检验操作规程(2015年版).pdf

1 目的 规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。 2 依据 《中国药典》2015 版。 3 范围 本标准适用于微生物限度检验。 4 责任 中心化验室负责人：对本 规程的实施负责。 中心化验室检验人员：严 格按照本规程执行检验操作。 精心整理 5 程序 5.1 执行标准： 《中国药典》2015 版。 5.2 抽样：照《取样标准操作规 程》进行。 6 内容 6.1 需氧菌总数、霉菌和酵 母菌总数计数 计数方法包括平皿法、 精心整理 薄 膜 过 滤 法 和 最 可 能 数 法 （MPN法）。检查时，按已验 证的计数方法进行供试品的 需氧菌总数、 霉菌和酵母菌总 数的测定。 6.1.1 设备、仪器及用具 6.1.1.1 设备 0 0 微生物限度检测室、净化工作台、生化培养箱（ 30～35 C）、生化培养箱（ 20～25 C）、 电热恒温水浴锅、烘箱、脉动真空灭菌柜、紫外灯等。 6.1.1.2 仪器及器皿 显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液枪及吸头、薄膜过滤 器等。 6.1.1.3 用具 大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、 灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。 精心整理 6.1.2 试液 6.1.2.1 消毒液 A ．0.1% 新洁尔灭溶液 B．75%乙醇溶液 6.1.2.2 稀释液、试剂及配制 A．pH7.0无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾 3.56g 、无水磷酸氢二钠 5.77g 、氯化钠 0 4.3g 、蛋白胨 1.0g ，加纯化水 1000ml，微温溶解，滤清，分装， 121 C灭菌 15分钟。 B．聚山梨酯 80 C．无菌十四烷酸异丙酯 D．pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 6.1.3 培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基 6.1.4 操作方法 6.1.4.1 试验前准备 6.1.4.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、移液枪吸头（ 1ml、10ml）、量筒、 稀释液、培养基等移至传递窗内。每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作 中出入操作间。 6.1.4.1.2 开启微生物检测室紫外灯和空调净化系统，并使其工作不低于 30min 。 精心整理 6.1.4.1.3 操作人员进入一更，用洗手液或肥皂洗手，烘干。进入二更，用 0.1% 新洁尔灭溶 液洗手，穿戴洁净无菌服、口罩、手套。 6.1.4.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手，再用乙醇棉球擦拭供试