- 1、本文档共86页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
第十六章;基因诊断的概念:
以DNA和RNA为诊断材料, 应用分子生物学技术方法,直接检查基因的结构、或表达是否异常,对人体状态和疾病作出诊断的方法。;用途——诊断下列两种类型疾病:;第一节 基因诊断;二、基因诊断的内容和技术;(1) DNA序列测定
(2)核酸分子印迹杂交
(3)聚合酶链反应(PCR)
单链构象多态性检测PCR-SSCP
限切酶酶谱分析PCR-RFLP
随机引物分析 PCR-RAPD
(4) DNA芯片技术
;1、点突变的诊断
PCR结合点杂交
DNA芯片技术
限制性片断长度多态性分析法RFLP;
正常基因:设计寡核苷酸探针M
GGTACGATGCGGTTAACGCG
CCATGCTACGCCAATTGCGC
突变基因:设计寡核苷酸探针N
GGTACGATGTGGTTAACGCG
CCATGCTACACCAATTGCGC ;;杂交的结果:;(2)诊断未知的点突变
常用检测方法:
①PCR-SSCP
②DNA芯片
③测序;①PCR-SSCP检测法
单链构象多态性
Single strand conformation polymorphism
SSCP; 基本原理
单链DNA在中性溶液中可形成一定的空间构象,构象与其碱基顺序相关。因此当单链DNA中碱基变异时,如碱基替换,它的空间构象也发生一定变化。这种现象称为单链构象多态性。 ; 单链DNA在非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,其迁移率不仅与链长有关,还与单链 DNA的空间构象有关,因此碱基变异引起的构象变化也可改变单链DNA的电泳迁移率。;ssDNA;2、少数核苷酸缺失或插入突变的诊断;3、大片断缺失或插入突变的诊断
常采用PCR法; 4、基因重排(染色体易位)的诊断
常采用PCR法;5、基因扩增的诊断
常采用Southern印迹杂交定量法; 关于多态性分析 ;1、限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析; DNA分子中某些碱基的变异(即位点多态性)可使某种限制性核酸内切酶的切点消失或出现新的切点,因此用同一种限制性核酸内切酶消化不同个体的DNA分子时,会产生各不相同的限制性片段类型。这种现象称为限制性片段长度多态性。; 限制酶酶切位点的改变造成的RFLP可分为两种情况:
① 限制酶识别位点发生单个碱基置换,导致酶切位点消失或获得,此称为点多态性。这种???态性只有两个等位片断,即多态位点的有或无。; ② 限制酶识别位点之间的DNA序列缺失、插入或重组,限制酶识别序列不发生变化,但它在基因组中的位置发生了变化。这种多态性可以有两个或两个以上的等位片断。;RFLP分析法
限制酶酶切图谱直接分析法
RFLP间接分析法;(1)限制酶酶切图谱直接分析法
① 限制酶酶切—Southern印迹杂交。
② PCR—限制酶酶切;应用RFLP诊断镰刀状红细胞性贫血;MstⅡ酶切位点;HbA;;(2)RFLP间接分析法——
RFLP连锁分析法
甲型血友病
疾病种类:X染色体连锁性遗传病
缺陷基因:凝血因子Ⅷ基因
主要临床表现:出血性疾病; 应用PCR-RFLP连锁分析法诊断甲型血友病
用一对引物扩增凝血因子Ⅷ基因第18外显子内的一个142bp片断,该片断含一个BclⅠ多态性位点。酶解后,如果存在BclⅠ酶切位点,则产生99bp和43bp两个片断;如果不存在则只有142bp一个片断。研究证明,142bp片断与甲型血友病基因连锁。;;2、DNA重复序列多态性分析;(三)基因表达异常的诊断
1、mRNA的定量分析
(1)相对定量
斑点杂交
RT-PCR
(2)绝对定量; 三、遗传病的基因诊断; (一)血红蛋白病
1.异常血红蛋白病
1、DNA检测与分析
(1)PCR-限制酶谱分析法
(2)Southern印迹杂交分析法
2、RNA检测与分析
RT-PCR;镰状细胞贫血病(sickle cell aneamia);2. 地贫
(1)?-地贫
1)DNA检测与分析
(a)RFLP
(b)PCR
2)RNA检测与分析
RT-PCR;(2)?-地贫的基因诊断
1) DNA检测与分析
(1)P
您可能关注的文档
- 出口合同的履行.ppt
- 出口增值税与退税的定义.pptx
- 出口收汇核销管理政策与操作实务.pptx
- 出口合同的支付条款.pptx
- 出口玩具检验监管培训课件.pptx
- 出口票据流程.pptx
- 出口管理措施.pptx
- 出口货物免退税会计核算.pptx
- 出口货物退免税会计培训.pptx
- 出口货物退(免)税王荣ppt一、出口货物退税概.pptx
- 2024-2034年中国家禽焚烧炉行业市场现状分析及竞争格局与投资发展研究报告.docx
- 2024-2034年中国生鲜牛乳行业供需分析及发展前景研究报告.docx
- 2024-2034年中国酸洗缓蚀剂行业市场现状分析及竞争格局与投资发展研究报告.docx
- 2024-2034年中国卫生棉棒行业市场深度调查评估及投资方向研究报告.docx
- 2024-2034年中国户用热量表市场行情动态分析及发展前景趋势预测报告.docx
- 2024-2034年中国细辛提取物行业市场现状分析及竞争格局与投资发展研究报告.docx
- 2024-2034年中国玻璃钢管式消声器行业市场现状分析及竞争格局与投资发展研究报告.docx
- 2024-2034年学生校服产品入市调查研究报告.docx
- 2024-2034年中国亚硝酸钡行业市场现状分析及竞争格局与投资发展研究报告.docx
- 2024-2034年中国建筑安装行业发展监测及发展趋势预测报告.docx
文档评论(0)