常见细胞核荧光染料.docx

细胞核常用荧光染料有： 吖啶橙（ Acridine Orange ，AO ）、溴化乙锭（ Ethidium Bromide ，EB ）和碘化丙啶（ Propidium Iodide ，PI），DAPI 、Hoechst 染料、EthD III 、7-AAD 、RedDot1 、 等等。 透膜的染料如下： AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核 DNA 和 RNA 分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。 EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准 302nm 处激发出橙红色信号。 DAPI ：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与 DNA 结合后可以产生比 DAPI 自身强 20 多倍的荧光，而与单链 DNA 结合无荧光的增强。 DAPI 对双链 DNA 的染色灵敏度要高于 EB 和 PI，荧光强度比 Hoechst 低，但光稳定性高于 Hoechst 。 Hoechst 染料：蓝色一类在显微观察中标记 DNA 的荧光染料，最常见的两种是 Hoechst33342 和 Hoechst33258 。这两种染料都在紫外 350nm 处被激发，在 461nm 处最大发射光附近发射青 /蓝色荧光。与 DAPI 相比， Hoechst33342 加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更 小。 RedDot 1 染料： 红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于 Draq?5 和 Draq?7 。 RedDot? 染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。 RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。 不透膜的染料，如下： PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。 PI 作为红色荧光复染剂首选， PI 经常与 Calcein-AM 或者 FDA 等荧光探针合用，区分死 /活细 胞。 EthD III 、7-AAD 、 RedDot 2 ： 不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测； 细胞核荧光染料（ PI DAPI Hoechst33342 ） 细胞核荧光染料 PI 碘化丙啶（简称 PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。它不能透过完整的细胞膜，但 PI 能透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的膜 而将细胞核 染红， PI 在绿色光 （540nm 波长）的激发下，会在 600nm （红色光） 处发出明亮的荧光 ，与细胞核中的 DNA 结合的 PI 发出的荧光，与未结合的 PI 相比，强 度会增强 20-30 倍。 40016Propidium iodide(PI)100mg40017Propidium iodide, 1.0mg/1mL solution in water10mL 碘化丙啶 英文名： Propidium iodide, Propidium diiodide; PI 分子式： C27H34I2N4 分子量： 668.39 外观：红棕 SF 末 应用： DNA 染色 染色原理： 碘化 丙啶 (PI)是一种溴化乙啶的类似物，它在 嵌入双链 DNA 后释放红色荧光 。尽管 PI 不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。 PI 经常被用 来与 Calcein-AM 或者 FDA 等荧光化合物一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。 光谱性质： PI-DNA 复合物的激发和发射波长分别为 535nm 和 615nm 。 染色 过程： 1． 用 PBS 或适当的缓冲液制备 10 ～ 50μM的 PI 溶液。 a) 2． 将 1/10 培养基体积的 PI 溶液加入到细胞培养基中。 b) 3 ． 在 37 ℃培养细胞 10-20 分 钟。 4． 用 PBS 或合适的缓冲液洗涤细胞两次。 5． 用 535nm 激发波长， 615nm 发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。 a) 由于 PI 可能具有致癌性， 请小心操作。 b) 也可以用 1/10 浓度的 PI 缓冲液代替培养基。 保存条件： 4℃避光保存 对人体有刺激性，请注意适当防护 1 / 3 DAPI 即 4,6- 二脒基 -2- 苯基吲哚 (4,6-diamidino-2-phenylindole) ﹐是一种能够与 DNA 中大部分 A ， T 碱基相互结合的荧光染料 ﹐常用与荧光显微镜观测。因为 DAPI 可以透过完整的细胞膜﹐它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下， DAPI 染剂是利用紫外光波长的光线激发。当 DAPI 与双股 DNA 结 合时，最大吸收波长为 358nm ，最大发射波长为 461nm ，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。 DAPI 也可以和 RNA 结合，但产生的荧光强度不及与 DNA 结合