染菌的检查分析和防止措施.pdf

染菌的检查、原因分析和防止措施 1.染菌的检查与判断 在发酵过程中对杂菌污染的及早发现，及时处理，是免除 染菌造成严重损失的重要问题。因此，要求有确切、迅速的方法 来检出杂菌的污染，目前常用方法主要有以下几种： （1）显微镜检查 通常用革兰氏染色法，染色后在高倍显微镜下观察。对霉 菌、酵母发酵，先用低倍显微镜观察生产菌的特征，然后再用高 倍显微镜观察有否染菌存在， 根据生产菌与杂菌的特征区别， 判 断是否染菌。必要时，可进行芽孢和鞭毛染色。 （2）平板划线培养或斜面培养检查法 先将经灭菌的固体培养基倒入灭菌的平板中置培养箱摄氏 37 度，保温 24h 检查无菌即可使用。 将需要检查的样品， 在无菌 平板上划线，分别置摄氏 37 度、摄氏 27 度培养，以适应嗜中菌 和低温菌的生长，一般在 8h 后即可观察。 噬菌体检查可采用双层平板培养法，底层同为肉汁琼脂培 养基，上层减少琼脂用量。先将灭菌的底层培养基熔后倒平板， 凝固后，将上层培养基熔解并保持摄氏 40 度，加生产菌作为指 示菌和待检样品混合后迅速倒在底层平板上，置培养箱保温培 养，经 12~20h 培养，观察有无噬菌斑。 培养基（ 7.0） 葡萄糖（ % ）牛肉膏（ %）蛋白胨（ % ）氯化钠（ %） 琼脂（ % ） 上层 0.5 1.0 1.0 0.5 1.0 下层 0.5 1.0 1.0 0.5 2.0 （3）肉汤培养检查法 将需要检查样品接入经灭菌并经过检查无菌的肉汤培养 基中，放置摄氏 37 度和摄氏 27 度分别培养 24h，进行观察，并 取样镜检。 此法常用于检查培养基和无菌空气是否带菌， 也可用 于噬菌体检查，此时使用生产菌作为指示菌。 葡萄糖酚红肉汤培养基： 牛肉膏 0.3%，葡萄糖 0.5%，氯化 钠 0.5%，蛋白胨 0.8%，1%酚红溶液 0.4%，7.2。 用以上的检查方法检查未发现污染，还不能肯定未被污 染。 除以上方法外，还可以从发酵过程的异常现象来判断是否 染菌，如溶解氧、 值、排气中 2 含量和菌体酶活力等变化来判断。 2.发酵染菌率和染菌原因分析 （1）发酵染菌率 发酵的总染菌率是指一年内发酵染菌的批数与总投料发酵 批数之比。 发酵染菌是在发酵罐中发生的染菌率，包括染菌后被挽救 不了导致倒罐的批数， 但种子罐培养的染菌不接入发酵罐， 不导 致发酵染菌的另行计算。 （2）染菌原因分析 在发酵染菌之后，必须分析染菌原因，总结发酵染菌的经 验教训，把发酵染菌消灭在发生之前，防患于未然，是积极制服 发酵染菌的最重要措施。 造成发酵染菌的原因很多，但总结归纳起来，其主要原因 有：无菌空气带菌、设备渗漏、灭菌不彻底、操作失误和技术管 理不善。在发生染菌后，根据无菌试验结果，参考以下方法进行 分析，找出原因，杜绝污染。 （A ） 从染菌时间来看， 发酵早期染菌， 可能原因有： 种子带菌， 培养基和设备灭菌不彻底，接种操作不当，无菌空气带菌；发酵 后期染菌，可能原因有：中间补料污染，设备渗漏，操作问题。 （B） 从污染的杂菌种类来看，污染耐热的芽孢杆菌，可能是培 养基或设备灭菌不彻底； 污染球菌、 无芽孢杆菌等不耐热杂菌可