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微生物的培养技术及应用
入门测
1.(2020·辛集市第一中学月考)培养基的配制需要运用灭菌技术。下列关于灭菌的叙述中,正确的是( )
A.杀死一定环境中的所有细菌 B.杀死一定环境中的所有的有害细菌
C.杀死一定环境中的所有微生物 D.杀死一定环境中的所有微生物的细胞
2.(2019·山东历下·济南一中高二期中)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )
A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
C.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 D.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板
3.(2019·山东罗庄·高二期末)做“微生物的分离与培养”实验时,下列叙述正确的是( )
A.高压灭菌加热结束时,打开放气阀使压力表指针回到零后,开启锅盖
B.倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上
C.为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D.用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上
4.(2019·山东历下·济南一中高二期中)判断选择培养基是否起到了选择作用,需要设置的对照是( )
A.不接种的选择培养基 B.接种的选择培养基
C.接种的牛肉膏蛋白胨培养基 D.不接种的牛肉膏蛋白胨培养基
5.(2018·山东师范大学附中高二期中)测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养,而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释,其原因是( )
A.细菌个体小,真菌个体大
B.细菌易稀释,真菌不易稀释
C.细菌在土壤中数量比真菌多
D.随机的,没有原因
课堂讲义
考点一:微生物的基本培养技术
知识点梳理
一、培养基的配制
1.培养基:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。
2.培养基的种类
3.培养基的营养组成
各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质,此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
营养物质
作用
功能
主要来源
碳源
能为微生物代谢提供碳元素
构成生物体的细胞物质和一些代谢产物,有些是异养生物的能源物质
无机碳源:CO2、NaHCO3等;有机碳源:糖类、脂质、蛋白质、有机酸等
氮源
能为微生物的代谢提供氮元素
合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物
无机化合物:N2、NH3、铵盐、硝酸盐等;有机氮源:尿素、牛肉膏、蛋白胨等
水
是生命活动所必需的
不仅是优良的溶剂,而且可维持生物大分子结构的稳定
外界摄入
无机盐
为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素,包括大量元素
细胞内的组成成分,生理调节物质,某些化能自养菌的能源,酶的激活剂
无机化合物
二、无菌技术
1.获得纯净的微生物培养物的关键:防止杂菌污染。
2.消毒和灭菌
消毒:使用较为温和的物理、化学或生物等方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物。常用方法:
煮沸消毒法、巴氏消毒法、酒精消毒法、紫外线消毒法。适用对象:操作空间、双手等
灭菌:用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。常用方法:湿热灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌。适用对象:接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等。
灭菌和消毒的种类
主要方法
应用范围
灭菌
湿热灭菌(高压蒸汽灭菌法)
100 kPa、121 ℃维持15~30 min
培养基及多种器材、物品
干热灭菌
干热灭菌箱160~170 ℃加热2~3 h
玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品
灼烧灭菌
酒精灯火焰灼烧
微生物接种工具,如接种环、接种针或其他金属用具等,接种过程中的试管口或瓶口等
消毒
煮沸消毒法
100 ℃煮沸5~6 min
家庭餐具等生活用品
巴氏消毒法
62~65 ℃煮30 min或80~90 ℃煮30 s~1 min
牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温灭菌的液体
紫外线消毒
30 W紫外灯照射30 min(使用前适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液可加强消毒效果)
接种室空气、超净台等
化学药物消毒
用体积分数为70%~75%的乙醇、碘酒涂抹,来苏尔喷洒,水源中通入氯气等
皮肤、伤口、动植物组织表面和空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等
典型例题:(2020·山东烟台·高二期中)在微生物的培养和研究中,获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。实验室常采用高压蒸汽灭菌、灼烧、干热灭菌、紫外线照射等几种灭菌方法,可分别杀灭哪些部位的杂菌( )
A.培养基、接种环、接种室、吸管 B.吸管、接种环、培养皿、接种箱
C.吸管、接种环、培养基、双手 D.培养基、接种环、吸管、接种箱
变式训练:
1.(多选题)(2020·山东菏泽·高二期末)发酵工程的第一个重要工作是选择优良
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