基因工程的基本工具和基本操作程序复习进程.ppt

;高频考点突破 考点一 基因工程的概念理解和理论基础 1.基因工程的概念理解 (1)操作环境：体外——关键步骤“表达载体的构 建”的环境。; 提醒 ①切割的化学键为磷酸二酯键。 ②在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶, 目的是产生相同的黏性末端。 ③将一个基因从DNA分子上切割下来,产生两个切口,同时形成四个粘性末端,切割载体产生一个切口，形成两个粘性末端。 ④不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末 端都相同,同一个DNA分子用不同的限制酶产生的 黏性末端不相同。; 2.DNA连接酶——“分子缝合针” ; 拓展提升 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较;3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” (1)类型 提醒 ①质粒本质是DNA,不是细胞器;②特点:小 型环状。 (2)功能：将目的基因导入受体细胞。 (3)应具备条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制； ②有一个至多个限制酶的切割位点,以便于与外源 基因连接； ③有特殊的遗传标记基因,供重组DNA的检测和鉴定。; 提醒 ①一般来说,天然载体往往不能满足人类的 所有要求,因此人们根据不同的目的和需要,对某 些天然的载体进行人工改造。 ②常见的标记基因有抗生素基因、产生特定颜色 的表达产物基因、发光基因等。 ③作为载体必须具有多个限制酶切点,而且每种酶 的切点最好只有一个。因为某种限制酶只能识别 单一切点,若载体上有一个以上的酶切点,则切割 重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制起 点区,则进入受体细胞后便不能自主复制。一个载; 体若只有某种限制酶的一个切点,则酶切后既能把 环打开接纳外源DNA片段,又不会丢失自己的片段。 ④注意与细胞膜上载体的区别,两者的化学本质和 作用都不相同。 ⑤质粒能自我复制,既可在自身细胞、受体细胞也 可在体外复制。;考点三 基因工程的基本操作程序 1.基因工程图解:抗虫棉的培育过程;二、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 (1)目的基因：指编码蛋白质的 。 (2)获取目的基因的方法 ①从基因文库 (基因组文库或cDNA文库)中获取 a．基因文库的含???：将含有某种生物不同基因的许多 ，导入 的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 ;;c．目的基因的获取依据： (ⅰ)基因的 序列； (ⅱ)基因的功能； (ⅲ)基因在染色体上的位置； (ⅳ)基因的 产物mRNA； (ⅴ)基因的翻译产物蛋白质。 ; ②人工合成目的基因:常用的方法有化学合成法和 反转录法。 化学合成法:蛋白质 氨基酸序列 RNA 碱基序列 DNA碱基序列 用4种脱氧核 苷酸人工合成目的基因 反转录法:分离出供体细胞mRNA 单链DNA 合成目的基因 ;③利用PCR技术扩增目的基因 a．PCR的含义：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。 b．目的：获取大量的目的基因 c．原理：DNA复制 d．前提条件：有一段已知目的基因的 和根据该序列合成的 e．过程：目的基因受热形成 ，与引物结合，在 的作用下延伸形成DNA。 f．方式：指数扩增＝2n(n为扩增循环的次数) ;PCR扩增技术与DNA复制的比较;２．基因表达载体的构建——最核心步骤 （１）表达载体的功能 ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且 给下一代。 ②使目的基因 和发挥作用。 （２）基因表达载体的组成:启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因。;　启动子：位于基因的 ，它是 识　　　　　　　　别和结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 　终止子：位于基因的尾端，终止 。 　标记基因： 是否含有目的基因。 （３）基因表达载体的构建方法 提醒 该过程把三种工具(只有两种工具酶)全用 上了,是最核心、最关键的一步,在体外进行。;3．将目的基因导入受体细胞 转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持 的过程。 (1)将目的基因导入