高血压病血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株分泌NOET的影响及丹参酮ⅡA的干预作用药学.docVIP

高血压病血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株分泌NOET的影响及丹参酮ⅡA的干预作用药学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：高血压病血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株分泌NOET的影响及丹参酮ⅡA的干预作用药学 1 1 材料与仪器 2 2 方法 3 3 结果 5 4 讨论 5 文2：2型糖尿病患者血清对人脐静脉内皮细胞骨架及胞浆内游离钙的影响临床医学 7 1 对象与方法 8 2 结 果 10 3 讨 论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 高血压病血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株分泌NOET的影响及丹参酮ⅡA的干预作用药学 文1：高血压病血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株分泌NOET的影响及丹参酮ⅡA的干预作用药学 血淤证见于多种疾病，是一种综合性病理状态，形成机理非常复杂。其形成与血液流变学异常、血流动力学异常、微循环障碍、血液凝固性、炎症病理过程、动脉粥样硬化、红细胞膜流动性及血管内皮细胞损伤等有关，其中热点是对血管内皮细胞损伤的研究。血管内皮细胞损伤与血淤证发生、 发展 密切相关，因此通过观察血淤证患者血清对人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）活性的影响，可深入研究血淤证形成的病理机制。本实验研究了高血压病血淤证患者血清对ECV-304分泌NO，ET的影响及丹参酮ⅡA（TanⅡA）的干预作用。 1 材料与仪器 细胞来源人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）由武汉大学“ 中国 典型培养物保藏中心”提供。 血清的收集 研究对象的选择高血压病血淤证组：40例，为2005-05～2006-05暨南大学附属第一 医院 心血管科、中医科门诊及住院确诊患者。诊断符合世界卫生组织/国际高血压病学会统一的“高血压病”诊断标准，血淤证诊断参照1986年修订的诊断标准。其中，按血压级别分为：2级高血压患者32例，3级高血压患者8例；男性患者22例，女性患者18例；平均收缩压（±）mmHg，平均舒张压（±）mmHg；平均年龄（±）岁。本课题选用的血淤证病例主要为气虚血淤证、阴虚血淤证、痰湿血淤证，少量为热结血淤证和气滞血淤证。所选病例能较好的代表血淤证的各种兼证的临床分布情况。 高血压病非血淤证组：40例，为同期暨南大学附属第一医院心血管科、中医科门诊及住院确诊患者。诊断符合世界卫生组织/国际高血压学会统一的“高血压病”诊断标准，其中，按血压级别分为：2级高血压患者31例，3级高血压患者9例；男性患者20例，女性患者20例；平均收缩压（±）mmHg，平均舒张压（±）mmHg；平均年龄（±）岁。 两组患者均为原发性高血压病患者，排除有靶器官损害或糖尿病，排除心、脑、肾等并发症，检查前1周未服用影响血压的药物。两组患者的血压分级、性别分布、平均血压、平均年龄无统计学差异（P），具有可比性。 健康组：选择暨南大学医学院中医系一年级本科生健康志愿者30人作为正常对照组。健康人血压均在正常范围，与高血压病患者（包括血淤证和非血淤证患者）血压比较，有统计学差异(P) 血清收集患者组及对照组均空腹取血，置入无菌带帽不抗凝干燥试管，自凝后离心（4℃，2 000 min，15 min），取上清液置无菌EP管，冻存于-20℃，备用。 药物及试剂配制TanⅡA系中国药品生物制品检定所生产，批号：110766-200417，取TanⅡA 2 mg，溶于50 μl的DMSO，制成母液，浓度为40 μg/μl，4℃避光保存。 一氧化氮试剂盒购自南京建成生物工程研究所，内皮素放免药盒购自解放军总医院科技开发中心放免所，DMEM培养基为Gibco公司产品；胎牛血清为杭州四季青生物工程材料研究所产品；胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）为Sigma公司产品；青霉素、链霉素为华北制药股份有限公司产品；其他试剂如碳酸氢钠、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、葡萄糖，均为国产分析纯。 仪器721分光光度仪为上海第三分析仪器厂产品；FJ-2008G型γ计数器为西安二六二厂产品；超速离心机为日本HITACHI公司产品。 2 方法 分组 血淤组与非血淤组、健康组及对照组比较①血淤组: 10％血淤证患者血清＋90％DMEM；②非血淤组：10％非血淤证患者血清＋90％DMEM；③健康组：10％健康人血清＋90％DMEM④对照组：100％DMEM。 药物分组（每组以10ml 计算 ）①血淤组：8 990μl DMEM＋1 000 μl血淤证患者血清＋10 μl DMSO；②TanⅡA 40μg/ml组：8 990 μl DMEM＋1 000 μl血淤证患者血清＋10 μl TanⅡA母液；③TanⅡA 20